补偿

无邪 · 发表于 2016-9-19 09:36:59

流式小白，请教一下大家，检测人外周血TREG分群，设模板的时候用Beads好一些还是用病人的外周血好一些？

zhsna · 发表于 2016-9-19 11:03:53

一般用正常人的外周血。Treg分群还是比较明显的。

zhsna · 发表于 2016-9-19 11:05:46

做个空白调好电压，单标个CD4调下补偿，再上样本。

无邪 · 发表于 2016-9-19 15:42:01

zhsna 发表于 2016-9-19 11:03
一般用正常人的外周血。Treg分群还是比较明显的。

好的，再请教一下，在流式上机检测的时候需要调节电压以及补偿。上机完自己在flowjo上分析的时候还需要调节补偿吗？

无邪 · 发表于 2016-9-19 15:46:18

zhsna 发表于 2016-9-19 11:05
做个空白调好电压，单标个CD4调下补偿，再上样本。

按照一个师姐以前的模板上机检测了，但检测的时候没有再调电压和补偿，就按模板收了图，这样的话我在Flowjo上的话，影响结果吗

niwanmao · 发表于 2016-9-19 17:02:36

无邪发表于 2016-9-19 15:46
按照一个师姐以前的模板上机检测了，但检测的时候没有再调电压和补偿，就按模板收了图，这样的话我在Flow ...

可以把数据传上来看看，记得把抗体信息附上来。

zhsna · 发表于 2016-9-20 10:08:20

无邪发表于 2016-9-19 15:46
按照一个师姐以前的模板上机检测了，但检测的时候没有再调电压和补偿，就按模板收了图，这样的话我在Flow ...

电压和补偿在需要调的时候调，上图看看

无邪 · 发表于 2016-9-20 11:57:39

我用的抗体是FITC-CD45RA，PE-CY7-CD27，Pacific Blue-CD127，Percp cy5.5-CD4，APC-CD25，PE-FOXP3。标本量是肝素抗凝外周血200ul，抗体是各1ul。图是设门方式。

无邪 · 发表于 2016-9-20 12:16:41

图中是文献的设门方式（J Immunol. 2012 Sep 15;189(6):3198-208. doi: 10.4049/jimmunol.1200602. Epub 2012 Aug 8）

niwanmao · 发表于 2016-9-20 14:15:40

无邪发表于 2016-9-20 11:57
我用的抗体是FITC-CD45RA，PE-CY7-CD27，Pacific Blue-CD127，Percp cy5.5-CD4，APC-CD25，PE-FOXP3。标本 ...

文件直接用了CD4和foxP3设门，没有用CD25，不过没关系，问题不大。

你的设门图里面散点图用了CD27和CD45RA，如果前面的T细胞和Treg细胞设门选择正确的话，那这个十字门和结果是可以的。

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