酿酒酵母周期检测请教

我爱学习

酿酒酵母悬液加入预冷70%乙醇中，SYTO9染色结果如下，并没有明显是G0/S/G2期。另做了PI染色，染色结果与SYTO9相似，没有分期，且比较分散，请问有用酵母做过周期检测的吗，protocol有什么建议，谢谢。

niwanmao

可以参考Current Protocol in Cytometry中的章节对照着优化试试：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-155-1-1.html

我爱学习

niwanmao 发表于 2016-9-20 08:00
可以参考Current Protocol in Cytometry中的章节对照着优化试试：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-155-1 ...

倪老师，我有用蛋白酶K50度消化过，效果不是很好，也是只有一个峰，我搜过其他人发过的文章，大致是乙醇固定，PI染色或者SYBR GREEN染色，会有两个峰。从图上看是我没固定好还是染色没染好呢

niwanmao

我爱学习 发表于 2016-9-20 15:42
倪老师，我有用蛋白酶K50度消化过，效果不是很好，也是只有一个峰，我搜过其他人发过的文章，大致是乙醇 ...

你要么试试下面这个方法：
Cells were counted, washed, and fixed in 70% EtOH 30% sorbitol. Samples were then treated with 1µM RNase A (Sigma, St. Louis, Missouri) in 50mM sodium citrate at 37° for 30 min., and stored at 4 C Prior to analysis, cells were stained with 1µM SYTOX Green
［文献出处：https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2586416/］

从图上看，效果确实很差，感觉PI这管酵母都碎了，Syto这管似乎没染好。

我爱学习

niwanmao 发表于 2016-9-20 18:23
你要么试试下面这个方法：
Cells were counted, washed, and fixed in 70% EtOH 30% sorbitol. Samples we ...

谢谢倪老师，我没有SYTOX Green，找别人借点SYBR Green试试。