淋巴细胞培养时刺激物作用是什么

yuan743561169

我们现在的实验是将H5N1全病毒灭活疫苗0d、14d滴鼻免疫Balb/c小鼠后，每周取鼻相关淋巴组织和颈部淋巴结测其活化T淋巴细胞及记忆性T淋巴细胞的表达量，从而评价该疫苗的细胞免疫效力。

具体步骤是将颈部淋巴结细胞和鼻相关淋巴组织细胞用红细胞裂解液处理后进行细胞计数。用含血清双抗的培养基调整细胞浓度2×106cells/mL，然后进行24孔板种板，每板加入500 μL含4 μg/mL的HA刺激物，加入500 μL上述调整浓度后的细胞混匀即可，即：1 mL/well（24孔板），刺激终浓度为2 μg/mL，细胞终浓度为2×106cells/mL。

问题：我想问实验过程中加入的HA刺激物的作用是什么？是促使细胞因子表达量增多吗？还是促进细胞增殖？

niwanmao

因为你用疫苗刺激之后，T细胞活化变成记忆T，之后不刺激，细胞会转入静止，各类辅助T代表性的细胞因子会表达水平很低，你无法检测出是什么细胞。
HA就是流感病毒表面的抗原，再次刺激原来产生的记忆性T淋巴细胞，会使记忆T快速活化，表达应该表达的因子或标记，然后用蛋白阻滞剂使表达的因子保留在细胞内，就可以检测出这些细胞比例了。

yuan743561169

niwanmao 发表于 2016-9-20 18:28
因为你用疫苗刺激之后，T细胞活化变成记忆T，之后不刺激，细胞会转入静止，各类辅助T代表性的细胞因子会表 ...

我见有资料在淋巴细胞培养时还加PHA，conA，IL-2等刺激物，请问这些刺激物该如何选择？我这个实验用的HA刺激物是因为是流感病毒免疫的原因吗？

小憨

yuan743561169 发表于 2016-9-21 17:01
我见有资料在淋巴细胞培养时还加PHA，conA，IL-2等刺激物，请问这些刺激物该如何选择？我这个实验用的HA ...

HA不是流感病毒上的抗原吗，一种叫血凝素A的抗原。你用流感疫苗免疫的，检测记忆细胞，当然得用同一种抗原再次刺激啦。
小鼠T细胞记忆性表型不是用CD62L和CD44就可以分出来吗，还可以再加一个CD127。做记忆性T细胞的好像不太多，我也在学习中，有说的不对的多担待，你要是有啥信息咱可以共同学习~

niwanmao

yuan743561169 发表于 2016-9-21 17:01
我见有资料在淋巴细胞培养时还加PHA，conA，IL-2等刺激物，请问这些刺激物该如何选择？我这个实验用的HA ...

你这个实验采用HA是因为流感病毒本身就是通过HA抗原刺激宿主，如@小憨 所说。
至于为什么不选择其它几种（PHA、ConA、IL-2等），这个跟研究目的有关，如果你能够找到疫苗最接近的刺激原，为什么不用呢？

hbezyr

1.用了HA刺激物，可以下结论说你检测的T细胞是IAV-specific的细胞。
2.至于你用的刺激物后，培养不同的时间，可以反映不同的功能状态
比如，HA刺激1+5h的ICS，表示疫苗所产生IAV-specific T细胞ex vivo的effector 功能
          疫苗刺激后的细胞，只加CD28+CD49d刺激，反映in vivo T细胞的effector 功能。
          HA+IL2 刺激3d,CFSE标记，可以检测增殖能力或是7天后看功能
          HA刺激后的细胞，分选出T，与IAV感染的A549共培养，验证T细胞的抵制病毒能力。

等等
你只要去看下怎么评价疫苗的文章，都是一样的套路。

3.最重要理解免疫的特异性！

yuan743561169

小憨 发表于 2016-9-21 18:55
HA不是流感病毒上的抗原吗，一种叫血凝素A的抗原。你用流感疫苗免疫的，检测记忆细胞，当然得用同一种抗 ...

我也是刚开始接触这个，很感谢你的分享，咱以后可以多交流交流

yuan743561169

niwanmao 发表于 2016-9-21 20:21
你这个实验采用HA是因为流感病毒本身就是通过HA抗原刺激宿主，如@小憨 所说。
至于为什么不选择其它几种 ...

那用流感病毒的HA刺激体外培养的淋巴细胞，不会使初始淋巴细胞活化变成记忆T细胞吗？记忆T细胞的细胞比例不会变吗？@niwanmao @小憨

yuan743561169

hbezyr 发表于 2016-9-21 22:58
1.用了HA刺激物，可以下结论说你检测的T细胞是IAV-specific的细胞。
2.至于你用的刺激物后，培养不同的时间 ...

学到了不少啊，我下去查查疫苗评价相关的文章，学习下，感谢

niwanmao

yuan743561169 发表于 2016-9-22 10:56
那用流感病毒的HA刺激体外培养的淋巴细胞，不会使初始淋巴细胞活化变成记忆T细胞吗？记忆T细胞的细胞比例 ...

体内免疫系统有一种复杂的调控机制，在受到抗原刺激时，部分转变为效应T，部分转变为记忆T，但在体外，我没做过但觉得应该不太可能，因为只有培养的这些淋巴细胞根本不够模拟一个完善的免疫系统。