应用流式检测细胞活性氧（ROS）结果怎么分析？

磊子-梦醒十分

下图是通过流式细胞术检测ROS的图，用的是DCFH-DA试剂，但不知道结果具体怎么分析？麻烦各位老师帮忙看看！
1.图中有两个峰是否正常？
2.M1和M2这样标是否不妥，应该怎么标合适？
3.应该读取哪个数据值，Mean、Geomean还是%Gated?

niwanmao

参考一下：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1477-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2155-1-1.html


我个人觉得你这个结果挺好的啊，两个峰的话从中间设门即可。你目前的位置是根据阴性对照设的吗？

磊子-梦醒十分

倪老师，你说的阴性对照就是不加探针的正常细胞吗？

对照组

实验组

上图是对照组，下图是实验组，M1、M2这样标对吗？分析结果时是读取M2的%Gated吗，倪老师？

niwanmao

磊子-梦醒十分 发表于 2016-9-23 08:20
倪老师，你说的阴性对照就是不加探针的正常细胞吗？
上图是对照组，下图是实验组，M1、M2这样标对吗？分析 ...

我个人认为应该按照下面红色门这样子，因为加了探针之后，可能会出现阴性群的背景荧光增强，所以还是需要按照峰的分隔设门会好一些。

han7525

niwanmao 发表于 2016-9-22 19:31
参考一下：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1477-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2155-1- ...

老师您好，我最近刚开始做流式测ROS，用的DCFH-DA，也遇到上面的情况，想请您帮忙看看。
1、图1中应该选FSC-H,SSC-H还是FSC-A,SSC-A？当时测的老师给我用FSC-A测的。
2、图2是只有细胞的样品，用来调仪器参数。
3、图3是对照组细胞，出现双峰是什么原因，会不会是探针没有洗干净？这个结果是不是不正常哦，还有从中间设门可以吗？4、图4红色是正常组，蓝色是给药组，是不是说明ROS降低了？

hlm

niwanmao 发表于 2016-9-22 19:31
参考一下：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1477-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2155-1- ...

老师这个设门依据是啥呀，如何设置对照组哇

niwanmao

hlm 发表于 2025-9-25 12:04
老师这个设门依据是啥呀，如何设置对照组哇

根据阴性对照设置。

通常的阴性对照可选择以下的一种或多种确认：
1.  使用未经处理的细胞（里面没有加入 ROS 诱导剂）。可能会有低水平。
2.  同种细胞，但不用对 ROS 荧光探针来染色或孵育。
3.  或者，可以用一些已经用探针染色但未进行 ROS 诱导处理的细胞，用来检测探针的基线荧光信号。
4.  也可以预先用抗氧化剂或 ROS 清除剂（比如 N-乙酰半胱氨酸）处理过的细胞，这些物质可以抑制 ROS 的产生。

hlm

niwanmao 发表于 2025-9-25 13:46
根据阴性对照设置。

通常的阴性对照可选择以下的一种或多种确认：

倪老师，假如我现在就是要测一些正常细胞的活性氧水平，这是测试组，本身对细胞不做其他处理，只染DCFH-DA探针，那么我阴性对照组是不是可以是未然色的空白组呢

niwanmao

hlm 发表于 2025-9-26 09:34
倪老师，假如我现在就是要测一些正常细胞的活性氧水平，这是测试组，本身对细胞不做其他处理，只染DCFH-D ...

空白对照，并非用于设门分析用，而仅仅是用于大致确定仪器电压是否合适而已

如果你要检测的是正常细胞并且活性氧水平非常低，其实是很难检测到的，一定要做的话，试试做一组用ROS抑制剂预处理过的同种细胞，例如5mM的NAC，处理30分钟。这仅是我的猜想，不一定对。

hlm

niwanmao 发表于 2025-9-26 20:14
空白对照，并非用于设门分析用，而仅仅是用于大致确定仪器电压是否合适而已

如果你要检测的是正常细胞并 ...

谢谢倪老师