鱼类，贝类等水产倍性分析实验流程

landinsky

1. 血液样本检测。取新鲜鱼血最多1ul，加入1ml Partec CyStain DNA 1 Step染液中，轻微晃动混匀，即可立即上机测试。这是全部的步骤，做鱼的倍性分析无需区分红细胞，白细胞，因为各种细胞的倍性都是一样的，同样倍性的各种细胞都会累积在同一个峰内，直接读主峰的Mean值即可。

2.组织样本检测。取黄豆粒大小的新鲜组织，加500ul Partec CyStain DNA 1 Step染液，用刀片切碎组织，用30um滤网过滤，再加入1.5ml CyStain DNA 1 Step染液，轻微混匀即可上机测试。从取样到出结果，一共两分钟。

需要注意的是，常规流式也就是只搭配488nm蓝色激光的流式无法使用该方案。另外也要注意仪器的设门和阈值。

niwanmao

感谢分享，不知道CyStain这种商品化试剂的成份是否可自配代替？
还有最后你说用只搭配488nm的流式无法使用该方案，能否给一个实例讲一下需要什么配置，需要如何设门，谢谢！

我爱学习

比较好奇Partec CyStain DNA 1 Step染液是什么激发光和检测通道，

landinsky

Partec一般用的是365或者405激光激发的，发射波长455nm

wmj123456

想请教个问题，最近在做牡蛎的凋亡实验，遇到1个难题，在fsc和ssc中，碎片背景和主细胞根本分的不清晰，整个是一团，不知道怎么设置阈值，请问前辈对于这个问题有好的经验分享吗？

niwanmao

wmj123456 发表于 2024-10-31 21:21
想请教个问题，最近在做牡蛎的凋亡实验，遇到1个难题，在fsc和ssc中，碎片背景和主细胞根本分的不清晰，整 ...

可以考虑使用其它DNA 结合染料（如 DAPI 或 Hoechst）帮助区分细胞和碎片

wmj123456

niwanmao 发表于 2024-10-31 21:57
可以考虑使用其它DNA 结合染料（如 DAPI 或 Hoechst）帮助区分细胞和碎片

倪老师，是用牡蛎做的凋亡实验，用的PI，PI染不了碎片和杂质，染死细胞，但是也区分不了活细胞和碎片杂质吧，其实应该用sybr green这种核酸染料来鉴别，可是目前没有，而且也是fitc通道，冲突了

niwanmao

wmj123456 发表于 2024-11-1 08:48
倪老师，是用牡蛎做的凋亡实验，用的PI，PI染不了碎片和杂质，染死细胞，但是也区分不了活细胞和碎片杂质 ...

不需要固定破膜就能染核酸的染料（Hoechst33342、DAPI）都可以的，紫外波段。
SyBR Green I平时在细菌、病毒等微生物研究中看到比较多，水产染色效果如何不太清楚。

你说的用PI染死活，那不行的，因为我们的目的是把核酸染上去，通过核酸量，排除掉碎片（不含或只含微量），如果固定破膜后再染PI，应是可以，但影响比较大，所以我相对倾向于活细胞染料搭配