流式周期拟合问题

972676742 · 发表于 2016-9-26 12:51:01

各位老师，前两天做了细胞周期，用Modifit拟合了一下，RCS都是10几，麻烦大家帮忙看看哪里有问题？数据收了有40000个细胞。看了站内的贴子，是拟合问题吗？但应该如何拟合呢？还是收数据的时候就有问题啊？

niwanmao · 发表于 2016-9-26 15:41:38

Modfit的RCS值提示拟合的曲线与真实结果的吻合程度，一般大于5不是很好，从你这个图形看，这是因为G1峰右侧存在一个右斜峰，所以拟合后真实曲线和拟合曲线存在较大出入。但从实际结果看，CV值还不错，并且其它部分也不存在异常峰，所以考虑这个右斜峰暂不用管。

如果要获取到更好的RCS和CV，首先需要获取的时候用低速，一定要低速，其次要处理好标本。

008@ · 发表于 2016-9-26 15:58:20

本帖最后由 008@ 于 2016-9-26 16:12 编辑

老师您好，我下载的modfit 3.1 ，设门的时候怎么没有FL2-W这个选项啊？只有width-width

972676742 · 发表于 2016-9-26 16:21:28

niwanmao 发表于 2016-9-26 15:41
Modfit的RCS值提示拟合的曲线与真实结果的吻合程度，一般大于5不是很好，从你这个图形看，这是因为G1峰右侧 ...

感谢倪老师，也就是说上面这个结果应该就是这样了，与拟合无关。可能原因是获取细胞以及样本处理过程的问题？获取数据时仪器是低速获取细胞的，上样速度大约是500-600 events/s，是否应该调低细胞浓度？

niwanmao · 发表于 2016-9-26 16:31:17

008@ 发表于 2016-9-26 15:58
老师您好，我下载的modfit 3.1 ，设门的时候怎么没有FL2-W这个选项啊？只有width-width ...

W选项只有BD的仪器有，如果是Beckman的就没有，可以用A/H

niwanmao · 发表于 2016-9-26 16:31:55

972676742 发表于 2016-9-26 16:21
感谢倪老师，也就是说上面这个结果应该就是这样了，与拟合无关。可能原因是获取细胞以及样本处理过程的问 ...

是的，细胞数量低一些，低速如果有500～600个细胞这个太浓了。

972676742 · 发表于 2016-9-26 16:35:20

niwanmao 发表于 2016-9-26 16:31
是的，细胞数量低一些，低速如果有500～600个细胞这个太浓了。

大概多少个每秒合适？

008@ · 发表于 2016-9-26 16:45:05

本帖最后由 008@ 于 2016-9-26 17:03 编辑

niwanmao 发表于 2016-9-26 16:31
W选项只有BD的仪器有，如果是Beckman的就没有，可以用A/H

老师，我是用的BD Accuri C6 仪器跑的，保存的.fcs格式，这种情况下那两个门我应该怎么设呀？横纵坐标不知道怎么选择了

niwanmao · 发表于 2016-9-26 21:16:54

972676742 发表于 2016-9-26 16:35
大概多少个每秒合适？

少一半

niwanmao · 发表于 2016-9-26 21:17:24

008@ 发表于 2016-9-26 16:45
老师，我是用的BD Accuri C6 仪器跑的，保存的.fcs格式，这种情况下那两个门我应该怎么设呀？横纵坐标不知 ...

C6是BD收购过来的，我没用过，你找找看有没有W或A、H的

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