细胞周期分析PI都是单峰

nana_ls

做了几次细胞周期分析，PI直方图都只有单峰，分不出细胞周期，不知道是为什么？

niwanmao

附件是C6文件，我们其它软件看不了，建议导出为FCS文件，这样其它软件也可以分析。

原因我只能认为是没染好。你做的是什么细胞？具体步骤是不是按照站内的protocol？

nana_ls

niwanmao 发表于 2016-10-10 15:56
附件是C6文件，我们其它软件看不了，建议导出为FCS文件，这样其它软件也可以分析。

原因我只能认为是没染 ...

谢谢倪老师。后来看了一下，blank和PI单染组pI的峰完全重合，应该是没染上。染的时候PI浓度是100微克/ml, 每管加1ul，会不会是PI量不够呢？

nana_ls

nana_ls 发表于 2016-10-10 17:31
谢谢倪老师。后来看了一下，blank和PI单染组pI的峰完全重合，应该是没染上。染的时候PI浓度是100微克/ml, ...

做的是B16F10黑色素瘤细胞

niwanmao

nana_ls 发表于 2016-10-10 17:31
谢谢倪老师。后来看了一下，blank和PI单染组pI的峰完全重合，应该是没染上。染的时候PI浓度是100微克/ml, ...

你对照一下站内的细胞周期protocol，看看自己的问题出在哪里，我觉得固定、破膜、染色都有可能，你的PI里面Triton有没有加？：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1330-1-1.html

nana_ls

niwanmao 发表于 2016-10-10 18:07
你对照一下站内的细胞周期protocol，看看自己的问题出在哪里，我觉得固定、破膜、染色都有可能，你的PI里 ...

嗯，谢谢倪老师。这次准备改一下，上次就是没有加Triton，只做了固定，是不是还是要破膜，protocol里triton X-100的浓度是多少呢？70%的冰乙醇是用PBS配吗？

niwanmao

nana_ls 发表于 2016-10-12 21:33
嗯，谢谢倪老师。这次准备改一下，上次就是没有加Triton，只做了固定，是不是还是要破膜，protocol里trito ...

前面protocol里面不是都写了吗

nana_ls

niwanmao 发表于 2016-10-12 22:06
前面protocol里面不是都写了吗

有没有常用的细胞周期试剂盒推荐呀。因为没有RNA酶，想着是不是直接买个试剂盒比较好

niwanmao

nana_ls 发表于 2016-10-18 11:06
有没有常用的细胞周期试剂盒推荐呀。因为没有RNA酶，想着是不是直接买个试剂盒比较好 ...

应该这些卖科研试剂的公司都有啊，不过需要选择一些质量可靠的公司，例如ebioscience、biolegend等，搜一下吧。

nana_ls

niwanmao 发表于 2016-10-18 14:55
应该这些卖科研试剂的公司都有啊，不过需要选择一些质量可靠的公司，例如ebioscience、biolegend等，搜一 ...

又做了一次，您看看这次又是为什么呢？PI显示染上颜色了，但是用modifit分析峰的位置还是不行。