淋巴细胞NK亚群分群问题

lypzy1221

倪老师，你好，我这边有一个问题想向您咨询。在我用BD的IMK试剂盒检测外周血中NK含量的时候，我发现有位患者的NK分群特别奇怪，磁珠分选后，检测他的NK阳性只有30%多，而其他NK分群正常的患者我用磁珠分选后NK阳性一般都有80%以上，请问这位患者的CD56表达是不是出现变异了，还是说有这么群CD56dim的细胞，只是他的抗原表达很弱？（我们使用的是BD C6流式细胞仪检测的）

niwanmao

lypzy1221 发表于 2016-11-14 08:06
试剂盒里面已经搭配好的，分别是CD3CD16/56CD45CD19

前面看图的时候没注意到你CD56和CD16是一个通道的，如果这样的话，就很容易解释了，就是需要封闭，CD16很容易出现非特异性结合。
或者你找一个CD56和CD16分开的，就很容易看出差异了。

lypzy1221

7-1的这位患者是正常的，我们这边检测的NK基本也都是和7-1的图形相同，7-18的这位患者差别太大了，按结果来说他的NK应该是25%

特勒兮兮

这个有30%吗，第一个怎么看也只有百分之20%度的样子，还有我想请问7-18第二个图你是怎么设门的呢，有什么标准 吗

niwanmao

从图上看，A02如果加上一个CD19抗体，就能够很完美的解决了，这类细胞属于CD56dim，但是我们平时做的时候CD56再弱，也可以很漂亮地分开，可能跟抗体效价有关，也可能与仪器有关。

我的建议是你改用密度图分分看。

lypzy1221

niwanmao 发表于 2016-11-7 18:44
从图上看，A02如果加上一个CD19抗体，就能够很完美的解决了，这类细胞属于CD56dim，但是我们平时做的时候CD ...

我传的FCS文件里面是有CD19抗体的，同一机器相同的抗体，就这个人的分不开，其他人的CD56dim与阴性是能够很好的分开的。所以效价及仪器应该与这个无关。我们在怀疑是不是因为他的细胞表面抗原有什么变异，因为磁珠分选的时候这部分细胞是与CD56+一起被选出来的

lypzy1221

特勒兮兮 发表于 2016-11-7 17:33
这个有30%吗，第一个怎么看也只有百分之20%度的样子，还有我想请问7-18第二个图你是怎么设门的呢，有什么标 ...

我说的是分选后再染CD56只有30%，第二个图射门是根据CD3+CD19+NK之和大约95左右，然后射门后，看R1的CD19阳性率，得到第二个图射门应该准确性高一些

niwanmao

lypzy1221 发表于 2016-11-8 08:49
我传的FCS文件里面是有CD19抗体的，同一机器相同的抗体，就这个人的分不开，其他人的CD56dim与阴性是能够 ...

有没有试过用血清封闭后再染？

lypzy1221

niwanmao 发表于 2016-11-8 19:39
有没有试过用血清封闭后再染？

那倒是没有。。。因为是直接用的外周血做的，里面有患者的血清~难道我可以再加点胎牛血清进去？

特勒兮兮

我也是用的C6。你孵抗体的时间是多长，加溶血素溶多长时间。