求助，Annexin PE/7-AAD检测凋亡结果分析

天天向上

请教各位战友，我用Annexin PE/7AAD检测凋亡。细胞转染带GFP的质粒，要预测该质粒是否有促凋亡作用。用转染了空质粒的细胞做对照。实验设计如下：  BD Accuri C6上样10000个细胞检测结果如下：  
1.未染色对照细胞

1

2. Annexin PE单染的对照细胞

2

3.7AAD单染的对照细胞

3

4.Annexin PE/7AAD双染的对照细胞

4

5.Annexin PE/7AAD双染实验组细胞。

5

ps:1-5都用凋亡诱导试剂作用48h。

细胞是贴壁细胞，消化时用不含EDTA的胰酶消化，时间可能有点长。试剂盒用的是ebioscience的。
本人刚刚接触流式，看到别人的图细胞都能分开，为什么我的是这样的啊
请各位帮我分析一下，是哪里出了问题，不胜感激

niwanmao

补偿没有调好。从PerCP-cy5.5里面减去PE信号多减一些，分群马上就看出来了。

天天向上

niwanmao 发表于 2016-11-7 18:30
补偿没有调好。从PerCP-cy5.5里面减去PE信号多减一些，分群马上就看出来了。

谢谢。还想问一下，我的对照设的正确吗？

niwanmao

天天向上 发表于 2016-11-8 18:53
谢谢。还想问一下，我的对照设的正确吗？

做AnnexinV/7-AAD染色时，一般只需要设置一个阳性对照即可，单染补偿对照根本 就不需要，因为分群很清楚。

天天向上

niwanmao 发表于 2016-11-8 19:48
做AnnexinV/7-AAD染色时，一般只需要设置一个阳性对照即可，单染补偿对照根本 就不需要，因为分群很清楚 ...

那个我用FlowJo10分析的时候，补偿按钮是灰色的，不能用。 难道是我的对照有问题？

niwanmao

天天向上 发表于 2016-11-9 22:46
那个我用FlowJo10分析的时候，补偿按钮是灰色的，不能用。 难道是我的对照有问题？ ...

FlowJo调节补偿需要调出那个补偿矩阵，有点麻烦。你可以到Beckman网站下载Kaluza试用版，那个调节补偿起来很方便。也可以下载艾森的NovoExpress试用版，也是可视化调节补偿。

天天向上

niwanmao 发表于 2016-11-10 11:24
FlowJo调节补偿需要调出那个补偿矩阵，有点麻烦。你可以到Beckman网站下载Kaluza试用版，那个调节补偿起 ...

倪老师，对照组凋亡率2%，实验组8%，这样的结果凋亡明显吗？

niwanmao

天天向上 发表于 2016-11-12 22:34
倪老师，对照组凋亡率2%，实验组8%，这样的结果凋亡明显吗？

多次重复，并非一次就可以

家的感觉

niwanmao 发表于 2016-11-7 18:30
补偿没有调好。从PerCP-cy5.5里面减去PE信号多减一些，分群马上就看出来了。

他（她）这个是带GFP的质粒是不是需要调节FL1和FL2的补偿？毕竟PE会接收到GFP的信号吧，个人理解

niwanmao

家的感觉 发表于 2016-11-14 09:07
他（她）这个是带GFP的质粒是不是需要调节FL1和FL2的补偿？毕竟PE会接收到GFP的信号吧，个人理解 ...

是的。这个我倒是忽略了