炎性树突状细胞

陈千慧

老师，你好

我刚接触实验，菜鸟一个，想问些问题，最近想做inflammatory DCs方面的，查了一些文献，用的表面标志物太多了，有CD11b+,CD11c+,MHCII+,Ly6C+,CD64+,F4/80+,CD103-,Fc￡RI+,CD40,80,86,206+等等，之前直接测DC就用CD11c+,F4/80-圈DC,然后测CD80,86,40等表面标记，现在测炎性树突状细胞，表面标记变了，应该不能用之前的方案来圈细胞了吧？应该用哪些表面标记来确定炎性树突状细胞呢？看文献上测流式时选的抗体的荧光标记都不同，那测流式的抗体荧光标记要如何选择呢？因为之前有师兄师姐用APC-Cy7-CD11c和PE-Cy5-F4/80测脾的DC，然后测PE标记的CD80,86,40等表面标记，有个师兄说这个方案有问题，我也不明白为什么？

niwanmao

看看下面这张图是不是对你标记的选择有帮助？


参考文献：
Cindy Hespel and Muriel Moser. Role of inflammatory dendritic cells in innate and adaptive immunity. Eur. J. Immunol. 2012. 42: 2535–2543

陈千慧

niwanmao 发表于 2016-11-9 21:21
看看下面这张图是不是对你标记的选择有帮助？

老师，您给的这张图是用CD11b+Ly6C+来确定炎性树突状细胞的意思吗？我看文献中有说用这两个标志物的，但也有说用CD11b+Fc￡RI+确定或者CD64+Fc￡RI+来确定的，并且还有文献说CD64+Fc￡RI+特异性最高，但前者这个方案用的人好像多一些，这样的话，我应该怎么选择呢？

niwanmao

陈千慧 发表于 2016-11-10 00:30
老师，您给的这张图是用CD11b+Ly6C+来确定炎性树突状细胞的意思吗？我看文献中有说用这两个标志物的，但 ...

只要有人在用，文章影响因子高，就可以拿来用，细胞表面很多标记，挑哪几个不是问题，主要是能够证明是这类细胞即可。
上图中的炎性DC标记不是只有CD11b＋Ly6C high，还有CD11c＋、MHCII＋、CD40＋、CD80＋

陈千慧

niwanmao 发表于 2016-11-10 11:28
只要有人在用，文章影响因子高，就可以拿来用，细胞表面很多标记，挑哪几个不是问题，主要是能够证明是这 ...

哦哦，明白了，老师，那我在测流式时选荧光标记时要注意些什么呢？我看我师兄师姐他们虽然都测的一种细胞，但用的荧光标记都不一样，有师姐用APC-Cy7-CD11c和PE-Cy5-F4/80测脾的cDC，然后测PE标记的CD80,86,40等表面标记，但有个师兄说这个方案有问题，我也不知道为什么，希望老师能为我解答一下，谢谢！

niwanmao

陈千慧 发表于 2016-11-12 21:09
哦哦，明白了，老师，那我在测流式时选荧光标记时要注意些什么呢？我看我师兄师姐他们虽然都测的一种细胞 ...

CD11b＋Ly6C high 、CD11c＋、MHCII＋、CD40＋、CD80＋
这六个抗体可以根据你的流式细胞仪，选择不同的荧光素搭配。

陈千慧

niwanmao 发表于 2016-11-13 15:33
CD11b＋Ly6C high 、CD11c＋、MHCII＋、CD40＋、CD80＋
这六个抗体可以根据你的流式细胞仪，选择不同的荧 ...

老师，我想选择CD11b+FcεRI high来确定炎性树突状细胞，那如果我选择FITC-CD11b、
Pe-Cy5-FcεRI，然后其余的表变标记都用PE来标记，这个方案可行吗？

niwanmao

陈千慧 发表于 2016-11-14 20:11
老师，我想选择CD11b+FcεRI high来确定炎性树突状细胞，那如果我选择FITC-CD11b、
Pe-Cy5-FcεRI，然后 ...

其它表面标记都用PE标记，如何区分哪个是哪个？而且成本并不见得省。

陈千慧

niwanmao 发表于 2016-11-14 20:15
其它表面标记都用PE标记，如何区分哪个是哪个？而且成本并不见得省。

就是用CD11b和FcεRI 染单染管、双染管、样本管，然后把细胞悬液分管子后分别标记PE标记的表面标记，然后分别用流式细胞仪来测这些表面标记的比例，这样可行吗？因为我看我师姐之前测经典DC就是用的APC-Cy7-CD11c和PE-Cy5-F4/80，然后CD80,86,40等表面标记都是用PE标记的，测的时候管子很多，很麻烦，那老师一般的方案是什么样的？

niwanmao

陈千慧 发表于 2016-11-14 20:59
就是用CD11b和FcεRI 染单染管、双染管、样本管，然后把细胞悬液分管子后分别标记PE标记的表面标记，然后 ...

你这样子不仅管子多，而且CD11c、F4/80每一管都要加，浪费严重。
如果你们的仪器可以做6色，这5个抗体就可以搭配成5色方案，直接一管解决。