GC B Cell在分析时该如何圈门？圈门策略？

征服

各位好：
      各位流式大神，求帮助，小的我在用流式分析生发中心B细胞（GC B cell）时不知该如何进行，还请各位大神帮帮忙，下图中是以A线路进行还是以B线路进行分析？或者应该是以哪种思路进行分析？求正确圈门策略。还请各位大神帮帮忙....多谢多谢！
      希望各位能说出自己的看法，尽量提供文献证据！

征服

即我在分析GC B细胞时，该以哪群细胞为主群细胞进行分析？

niwanmao

征服 发表于 2016-11-28 14:12
即我在分析GC B细胞时，该以哪群细胞为主群细胞进行分析？

A不是单核吗？为什么选A呢？

征服

niwanmao 发表于 2016-11-28 22:04
A不是单核吗？为什么选A呢？

A确实是单核，只是分析的时候B220也在其中，比例并不低，昨天搜集文献后，确定找到的一篇PLOS Pathogens上文章的分析方法是全部圈上（如下图），所以就不知道单核要不要分析，老师，您的意思是按B线路走，只分析淋巴群中的B220作为GC B cell的划分依据？

征服

征服 发表于 2016-11-29 12:34
A确实是单核，只是分析的时候B220也在其中，比例并不低，昨天搜集文献后，确定找到的一篇PLOS Pathogens ...

可惜不知道怎么上传图片了，文章题目是IFNAR1-Signalling Obstructs ICOS-mediated
Humoral Immunity during Non-lethal BloodStage Plasmodium Infection；DOI为doi:10.1371/journal.ppat.1005999

niwanmao

征服 发表于 2016-11-29 12:37
可惜不知道怎么上传图片了，文章题目是IFNAR1-Signalling Obstructs ICOS-mediated
Humoral Immunity dur ...

我看好多文献都是用B220/SSC设门的嘛。

liyongjixb

niwanmao 发表于 2016-11-29 18:14
我看好多文献都是用B220/SSC设门的嘛。

倪老师，您好，这图中的A是淋巴细胞B是单核细胞，对吧？，但是我们进行B220染色之后发现，呈现b220有三个峰

征服

niwanmao 发表于 2016-11-29 18:14
我看好多文献都是用B220/SSC设门的嘛。

是的，我搜了不少文献也是用B220和SSC圈门的，但是感觉这样有点不妥，想用细胞群体进行限制（因为粒细胞群没有必要分析B220吧），所以想找证据支撑。

征服

liyongjixb 发表于 2016-11-30 08:36
倪老师，您好，这图中的A是淋巴细胞B是单核细胞，对吧？，但是我们进行B220染色之后发现，呈现b220有三个 ...

我们染色的结果也显示淋巴群中B220是阴阳两群，单核群中B220显示三群

niwanmao

征服 发表于 2016-11-30 10:35
是的，我搜了不少文献也是用B220和SSC圈门的，但是感觉这样有点不妥，想用细胞群体进行限制（因为粒细胞 ...

B220和SSC设门没问题啊，因为即使像你所说的，单核出现B220染色阳性，也可以在该散点图上通过SSC（Log）区分开的。
此外，单核细胞如果出现B220阳性，我怀疑Fc受体非特异性结合可能性更大，解决方法参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5510-1-1.html