要想分析好，三个门不能少

niwanmao

要使设门方法可靠，这中间的技巧还是很复杂的，首先就需要对目标细胞群的特点充分了解，并且排除掉一些干扰信号。 在论文中的图片，通常只讲述了部分，却把很多重要的门藏起来了。 所以为了实现多中心研究和提高可重复性，理解每个门的设置原因和特异性非常关键。

Maeker等人在《A modelfor harmonizing flow cytometry in clinical trials》（刊于Nat Immunol. 2010Nov;11(11):975-8. http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/20959798）中指出，因为数据分析导致的结果变异，每个实验室可高达20.5％，如果通过中心统一检测，可减少至4％。

当给新手培训数据分析时，需要告诉他们一些真正好用的设门经验，避免一些错误的观念，例如很多研究人员都习惯性一定要把FSC/SSC散点图作为第一个设门图，而实际上，需要事先排除掉粘连体、碎片、坐标边缘信号，并且建议最好用一个特异性标记选出目标细胞（例如用CD45/SSC设门选择淋巴细胞会比FSC/SSC更理想）。

今天就给大家介绍三个分析时不可缺少的门，这些门对于正确和良好的数据分析非常关键，可避免很多异常信号影响，尤其是目标细胞很稀有的时候。

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huananlou101

在backman 的系统中如何设置排除门？

niwanmao

huananlou101 发表于 2016-12-8 21:17
在backman 的系统中如何设置排除门？

dump channel与机器无关，是多种系列特异性抗体混合而成。具体含义参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5074-1-1.html

会开花的笔

我想问，如果一份血样本，处理后胞内胞外都需要染色，但是隔2天才能上机，是处理好血样本后固定放置还是染色后再固定放置，还是什么其他的方式最好，隔2天会不会影响数据呢

niwanmao

会开花的笔 发表于 2016-12-10 10:25
我想问，如果一份血样本，处理后胞内胞外都需要染色，但是隔2天才能上机，是处理好血样本后固定放置还是染 ...

为什么隔两天才能上机？一般还是需要先固定，你需要先看看多聚甲醛固定会不会影响你的抗原表达。

也可以考虑流式中文网出品的〖细胞保存液（临床和科研标本保存最佳搭档） 〗https://shop18622451.koudaitong.com/v2/showcase/goods?alias=270a60ykvgg6z&reft=1481349898510&spm=f45886504&oid=0

会开花的笔

niwanmao 发表于 2016-12-10 14:08
为什么隔两天才能上机？一般还是需要先固定，你需要先看看多聚甲醛固定会不会影响你的抗原表达。

也可以 ...

因为周末实验室流式机不开机……

张健

老师，您好，我想问以下，如果有细胞内染色，（需要打孔,破膜），那么怎么区分死活细胞？PI是利用死细胞膜打开，应该用PI是不行的。不知道老师知道EMA吗？

niwanmao

张健 发表于 2016-12-11 20:41
老师，您好，我想问以下，如果有细胞内染色，（需要打孔,破膜），那么怎么区分死活细胞？PI是利用死细胞膜 ...

EMA应该不行，似乎也是通过渗透性鉴别的。

需要用胺类染料鉴别，live/dead系列中有一种适合fixable标本的死活染料可以。

qingshi

会开花的笔 发表于 2016-12-10 10:25
我想问，如果一份血样本，处理后胞内胞外都需要染色，但是隔2天才能上机，是处理好血样本后固定放置还是染 ...

我可以确定的说，不影响，一个样品我连续做过三天的分析，比例差异在3%之内。

niwanmao

qingshi 发表于 2019-1-29 22:26
我可以确定的说，不影响，一个样品我连续做过三天的分析，比例差异在3%之内。 ...

个别抗体会受固定影响的。