避免标本堵机器的4大绝招

niwanmao

流式细胞仪除了硬件问题之后，平时最怕的就是标本堵了进样针，因为进样针是机器上最细的部分，一旦堵牢，你就取不到信号，或者只取到一些噪音。我们经验丰富一点的还会去冲一下机器（参见论坛内《BD FACSCanto II进样针堵的应对绝招》，下次发一篇Beckman Navios的进样针除堵帖），但大多数人只能叫工程师。无论如何，都会耽误实验，甚至导致实验失败。

所以，最好的办法就是：预防。所谓〖预防〗，就是事先保证样本内是十分单纯的单个 －－活细胞。

这里谈一下导致样本形成团块堵住进样针的3个常见原因，然后结合原因提出对策，最后再加1个终极绝招，收好勿谢！

1、死细胞

死细胞可释放出核内DNA，DNA的粘性会导致细胞粘附在一起形成团块。

解决方法
    如果您的样本死细胞过多，那么建议每ml标本中加入1单位DNAse，可有效减少这种情况。
    名词解释：所谓1单位DNAse指的是在37°C、10 mM Tris·HCl, pH 7.5, 50 mM MgCl2, 13 mM CaCl2条件下，10分钟内降解1ug质粒NDA所需要的酶量。

2、阳离子
钙离子和镁离子可促进细胞成团。

解决方法
    1、使用不含Ca++和Mg++的PBS作为缓冲液进行染色、洗涤
    2、可往缓冲液中加入1mM EDTA(如果你用Qdot染料，这步就很重要，参见https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/21182185)


3、离心力过大
如果离心力过大，会导致细胞离心沉淀后的团块过硬，就很难分开。

解决方法
    需要事先了解每台离心机的离心速度和离心力的换算，幸运的是，现在大多数高档离心机都有离心速度和离心力两种方式可用。记得摸索出适合你实验细胞类型的离心力(最好用离心力，更客观)。我们平时的离心力一般用400～500g。


4、没注意，团块形成了，怎么办？

只能祭出终极招数了：过滤样本。

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