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[流式相关软件] 请大家帮我看看间标结果

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发表于 2016-12-15 16:43:44 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏2流星未解决
新人发帖,有不到之处请大家海涵,新开始做流式,很多地方不清楚,请大家不吝赐教。
背景:以前没有做过流式间标,为测试体系和抗体是否工作,选用阳性细胞系HepG2,一抗为细胞表面抗原CDH1,二抗为对应种属的488标记荧光二抗,一抗二抗用量皆为1ug,红色柱子为阴性对照(仅孵育二抗),蓝色柱子为4℃下孵育的抗体,橙色柱子为室温下孵育的抗体。
问题:
1。不同温度下孵育结果相差不大,但与阴性对照组相比阳性样品仅能看出峰移,二分门统计也就25%阳性率,这是抗体的问题还是手法的问题,还是设置不当的问题呢?
2.用 FlowJO打开原始数据提示有45%的事件在坐标轴上(右侧),我细分了下,发现大部分都是FSC坐标轴右侧上。因为技术员在使用阴性样品调试电压时为了美观似乎有意在FL1通道将阴性峰图右移,所以我想是不是影响到了FSC通道的数据采集,导致大量事件超出了上限,打在了坐标轴上
3。反映在荧光通道上,就是下图最右侧有个小峰,这个又该怎么理解呢?
20161215-Layout.jpg QQ截图20161215164251.png

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 楼主| 发表于 2016-12-15 22:09:54 | 显示全部楼层
{:soso__3669389859068460655_4:}欢迎指教啊
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 楼主| 发表于 2016-12-16 11:12:46 | 显示全部楼层
貌似我击中了一个盲区{:soso__3669389859068460655_4:}
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 楼主| 发表于 2016-12-16 16:23:51 | 显示全部楼层
落笔翘首盼心急,门前冷落鞍马稀
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发表于 2016-12-16 20:11:42 | 显示全部楼层
1、首先确认一抗和二抗的种类选择都正确,染色时间也没问题,那么还是需要考虑抗体问题,不知道是否进行了滴定?不存在手法不手法的问题。
2、FL1的电压不会影响到FSC,你需要看你的仪器是什么机器,在机器的自带软件上显示是否正确,如果机器上显示正确,那么需要考虑数据文件的兼容性问题,如果机器上也不正确,那就是FSC电压偏大。
3、右侧小峰属于噪音信号。
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