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[标本处理] PMA刺激T细胞后分泌IFN-γ,检测不到TNF-α

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发表于 2016-12-16 10:04:33 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
用PMA刺激T细胞,12小时后加入抑制剂,5小时后做胞内染色,能检测到IFN-γ,却检测不到TNF-α的分泌?这是什么原因呢?按理说IFN-γ有分泌,说明细胞被激活了,为什么检测不到TNF-α的分泌呢?

发表于 2016-12-16 20:00:11 | 显示全部楼层
两者并一定同步表达啊。
 楼主| 发表于 2016-12-19 15:38:20 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2016-12-16 20:00
两者并一定同步表达啊。

老师,那请问是PMA刺激时间的原因吗?是不是TNF-α需要刺激更长时间?
发表于 2016-12-19 16:57:04 | 显示全部楼层
Jing310 发表于 2016-12-19 15:38
老师,那请问是PMA刺激时间的原因吗?是不是TNF-α需要刺激更长时间?

T细胞会表达大量的TNF-α吗?我还是第一次听说
 楼主| 发表于 2016-12-20 11:05:06 | 显示全部楼层
小憨 发表于 2016-12-19 16:57
T细胞会表达大量的TNF-α吗?我还是第一次听说

可以得,但是从文章流式图上看不会像IFN-γ那么多
发表于 2016-12-21 09:39:38 | 显示全部楼层
本帖最后由 Victorrwang 于 2016-12-21 11:44 编辑

看细胞了,比IFN-gamma多也很正常
Sm152_TNFavsHo165_IFNg_dy.png
 楼主| 发表于 2016-12-22 10:23:50 | 显示全部楼层
Victorrwang 发表于 2016-12-21 09:39
看细胞了,比IFN-gamma多也很正常

您好,我想问下测TNF-α分泌时,PMA刺激方法跟测IFN-γ一样吧?
我做了两个时间点,一是PMA刺激24小时,二是刺激12小时,IFN-γ都有分泌,但TNF-α都没有分泌。不知道怎么回事。
发表于 2016-12-23 01:33:55 | 显示全部楼层
Jing310 发表于 2016-12-22 10:23
您好,我想问下测TNF-α分泌时,PMA刺激方法跟测IFN-γ一样吧?
我做了两个时间点,一是PMA刺激24小时, ...

PMA + Ionoymcin for 4 hours with golgistop or(and) golgiplug
发表于 2016-12-24 17:08:49 | 显示全部楼层
1.你只是用了PMA来作刺激?

2.你的时间是不是有点长了?浓度是多少?
3.你的阻断剂是什么?做TNFa时,必须是加BFA才行.
 楼主| 发表于 2016-12-26 09:46:46 | 显示全部楼层
hbezyr 发表于 2016-12-24 17:08
1.你只是用了PMA来作刺激?

2.你的时间是不是有点长了?浓度是多少?

1 我只是用了PMA和离子霉素;
2 下次我再缩短时间到5-6小时看看,浓度那个买来是250X的
3 我加了阻断剂,是Golgiplug,这个里面含有BFA
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