〖你问我答〗双阳性，是真是假？

niwanmao

先来看这么一幅图：

你觉得图中箭头所指处是CD4、CD8双阳性信号吗？
如果你是做这个实验的人，会怎么办？

…

…

…

其实，这些位于对角线上呈彗星样拖尾的信号基本上是死细胞引起的假阳性信号。做流式实验，最怕的就是假阳性。

假阳性的原因很多，比较常见的有之前讲过的非特异性结合，但那种是分群不清的，通过Fc Block可以阻断。但最最怕的就是像上面这种偏移很明显、怎么看都应该是真正阳性的情况。这种就是死细胞任意粘附抗体造成的非特异性假阳性，通过DAPI等核酸染料将死细胞排除掉，就可以看到下面这幅图这样，刚才的双阳性消失了：

通过DAPI排除掉死细胞，可看到箭头所指处的双阳性信号消失了，证实了死细胞引起的非特异性阳性。
上面这个例子是从推特上看到的图片转来的，但就在前几天，流式中文网上@mlwang 站友也提出了类似的问题《在流式图的对角线位置为何都有一条长尾巴》，并放出了三张图，重复重复都是如此：


后来该FLOWER根据建议排除掉死细胞（通过FSC/SSC排除，虽然不严谨，但在某些情况下可以暂时用一下，最好的当然是用核酸染料或者商品化死活染料），于是图形就变成下面这样了：


图A、通过FSC/SSC排除凋亡和细胞碎片，同时将一些死细胞排除掉，虽然不严谨，但在某些情况下可以暂时用一下，最好的当然是用核酸染料或者商品化死活染料


图B、只圈状态良好的细胞，就可看到对角线长尾巴没了。

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