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本帖最后由 Justin-威 于 2016-12-30 15:24 编辑
实验材料:
1;一抗:兔多抗CD3E(浓度0.3mg/ml)
2;二抗:FITC-羊抗兔IgG(浓度2mg/ml)
3; 浓缩型山羊血清
4;细胞用PBS缓冲液
5;样本:Jurkat细胞(2x107个/ml)
实验分组:
间标实验步骤:
1;取7个1.5ml EP管,每管加200μl 样本细胞,分别标记为B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7。
2;根据实验分组分别加入相应量的浓缩型山羊血清,37度孵育10分钟,不洗。
3;根据实验分组分别加入相应量的一抗,37度孵育30分钟。离心清洗3次,转速1500rmp/min,时间5分钟。
4;根据实验分组分别加入相应量的浓缩型山羊血清,37度孵育10分钟,不洗。
5;根据实验分组分别加入相应量的二抗,37度避光孵育30分钟。离心清洗3次,转速1500rmp/min,时间为每次5分钟。
4;上机分析结果。(FITC通道电压默认为124,手动调节为30,补偿无需调节。用BLANK组画散点图,圈门,再画叠加直方图,观察趋势)
实验结果:
以上是阴性对照的几个图,从直方图来看,封闭对抑制非特异染色作用明显
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