固定对细胞影响这么大么？

Justin-威

Jurkat细胞固定（4%多聚甲醛20分钟）和不固定两种处理方式跑出来的散点图差异比较大，固定后的细胞成明显的一团，没固定的左下方有一片斜向上的一团，区别于主要的细胞团，不知道是什么。大家看看固定对细胞的影响是否比较大

niwanmao

这是因为固定过之后，细胞FSC变小，于是与原来碎片区域重叠了。4％的多聚甲醛是比较厉害的。

Justin-威

试过好几次，每次的情况都是这样。两种处理方式的细胞来源于同一瓶培养细胞

angelina8709

固定后细胞死了，只有一群；没有固定的细胞大部分是活的，所以有两群。

Justin-威

niwanmao 发表于 2017-1-5 19:59
这是因为固定过之后，细胞FSC变小，于是与原来碎片区域重叠了。4％的多聚甲醛是比较厉害的。 ...

倪老师，如果是这样的话，细胞和碎片重叠了，设门岂不是误差很大（圈定这一群细胞后里面其实有很多是碎片）。还有一个问题要是只做单染，不做多色，每次实验都染PI，用来标记碎片，可行性大不大

niwanmao

Justin-威 发表于 2017-1-6 16:42
倪老师，如果是这样的话，细胞和碎片重叠了，设门岂不是误差很大（圈定这一群细胞后里面其实有很多是碎片 ...

是的，所以要么不固定，用死活染料区分。
要么固定后，加上特异性的标记分群。