〖你问我答〗同样的细胞，同样的荧光素，为什么补偿不一

niwanmao

问

论坛上，经常会有FLOWER会问，我的抗体一下子找不到很好的单阳性对照调节补偿，是不是可以借鉴相同荧光素其它抗体的补偿，或者使用师兄师姐用过的相同荧光素其它抗体补偿？

在回答之前，先来看看下面这两个图：

图1、分别用CD57 PE和CD45RO PE-Texas Red两个单染管调节补偿，最后应用到CD57和CD45RO双染管，可见补偿调节得非常完美


图2、同样是CD57和CD45RO双染管，但用来调节补偿的是CD3 PE-Texas Red和CD57 PE两个单染管，相当于只是将目标抗体CD45RO换成了CD3，其荧光素不变。结果CD57和CD45RO就变成上图那样，CD57减去CD45RO的补偿过度了。
这是为什么呢？

答

关键就在这个串联染料！

如果是非串联染料，例如FITC、PE、PerCP、APC、Alexa系列等等，你用CD3代替目标抗体进行补偿调节，没有问题。

但串联染料不同，例如前述的PE-Texas Red（也就是ECD），还有PerCP-cy5.5、PE-cy7、APC-cy7、APC-A700等等，不同批号之间会有所不同，甚至同一管抗体，经过较长时间保存或者受光照影响，都会导致补偿发生一定的改变，所以不同抗体即使结合了同一种荧光素，他们的补偿也不一定通用（当然，不是绝对不行，只是说存在这个风险）。

一句话：即使同一种串联染料，调节补偿时也要将不同抗体都当成不同的染料标记

—EOF—

苏沁沁

倪老师我也有这种情况、还是在免疫细胞里、单染管都调的好好的、一到样品管里、补偿就不行了、还得每管再调一次、FITC、PE、PC5.5、PECF594、BV510、DAPI等等都有的