一条公式，即可定量评估骨髓稀释情况

niwanmao

背景

骨髓抽吸物常规用于流式细胞术实验室中的血液恶性肿瘤的诊断和随访。 但由于抽吸时，第一管少量用于骨髓涂片评估形态学，第二管抽较大的量用于流式项目和其它检测，所以不可避免地被外周血稀释。 因此，从形态学分析获得的BM细胞群体的百分比通常不同于FCM分析得到的百分比。

虽然骨髓受到一定量的外周血稀释是不可避免的，但是如果稀释过度，就容易使结果不能真实反映骨髓内细胞组成。所以，低质量的BM应该被丢弃或谨慎报告，特别是在一些特定的FCM应用，例如微小残留病（MRD）定量检测。

尽管骨髓稀释水平如何很重要，但大多数实验室不进行稀释水平的常规评估。 对于骨髓质量评估，有些共识建议同时进行样品的形态学评估，而有些指南没有提及这个问题。即使进行形态学评估，还是存在两个问题：

首先，许多流式实验室没有形态学评估条件。
第二，形态学是一种定性方法，可以识别被外周血明显稀释的骨髓，但对于稀释不明显的，却很难定量。
以前，只有一种报道的方法可定量地估计骨髓样品中的外周血污染情况（Holdrinet, R.S., von Egmond, J., Wessels, J.M., Haanen, C., 1980. A method for quantifica- tion of peripheral blood admixture in bone marrow aspirates. Exp. Hematol. 8, 103–107.），并得到了证实和应用（Brooimans, R.A., Kraan, J., van Putten, W., Cornelissen, J.J., Löwenberg, B., Gratama, J.W., 2009. Flow cytometric differential of leukocyte populations in normal bone marrow: influence of peripheral blood contamination. Cytometry B Clin. Cytom. 76, 18–26.），但由于该方法需要同时采集到患者外周血，所以无法广泛使用。

在2016年12月29日在线发表的《Delgado, J.A., et al., A simple flow-cytometry method to evaluate peripheral blood contamination of bone marrow aspirates, J. Immunol. Methods (2016)》中，作者提出了一种简单的FCM方法，用于定量评估骨髓样本中外周血污染的程度，只需一条公式即可，不需要复杂的计算或额外的配套外周血样品。

方法
样本：共188例骨髓样本，其中122例没有血液系统疾病，66例为血液病患者（11例MGUS、35例MM、20例B-CLPD）。
方案：

anti-CD38 FITC
anti-CD34 PE
anti-CD138 PerCP-Cy5.5
anti-CD10 APC
anti- CD45 APC-H7

获取细胞量：30万
设门：

用SSC/FSC和SSC/CD45圈出白细胞，之后分析：
（1）干祖细胞比例：CD34＋CD45＋/lo，计算其占白细胞的比例。
（2）浆细胞比例：CD38＋＋CD138＋，计算其占白细胞比例。
（3）CD10＋中性粒细胞比例：通过CD45＋SSChi和CD10＋，圈出这种占外周血粒细胞绝大部分的中性粒细胞，计算其占中性粒细胞比例。
公式

通过一种多参数统计学方法discriminant analysis产生一个公式函数，称为外周血污染指数（PBCI）。公式如下：

PBCI＝－3.052＋0.065×(CD10+中性粒细胞比例)－0.609×（干祖细胞比例）－2.008×（浆细胞比例）

判读
质量好的正常骨髓PBCI平均值在 －1.00（均<1.2）。
外周血 PBCI大约在3.4。


图1、 非血液病骨髓样本的外周血污染指数(PBCI)分布，质量好的骨髓(GC，94例) PBCI<1.2(只有1例为1.55)，稀释明显的骨髓(CONT，27例) PBCI≥1.2。


图2、血液病患者（MGUS、MM和B-CLPD）的骨髓外周血污染指数(PBCI)分布，质量好的骨髓(GC，47例) PBCI全部<1.2，稀释明显的骨髓(CONT，19例) 中，其中18例PBCI≥1.2，只有1例1.1。

因此，可以利用PBCI≥1.2作为评估骨髓被外周血明显稀释的定量指标，对于稀释明显的骨髓样本，解读细胞比例（尤其是MRD）需要谨慎。计算PBCI的重复劳动，交给计算机，访问http://www.flowcyto.cn/bbs/pbci.html，或关注我们的微信公众号“流式中文网”（通过菜单“专业功能”－“外周血污染指数计算器”）即可快速计算结果并给出提示。

https://flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=attachment&aid=MTE4OTR8NzU0Yjc2Mjl8MTczMTQ5NzI3N3wwfA%3D%3D

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