流式细胞术常用术语

niwanmao

术语并非一成不变，而是反映了流式细胞仪技术中重要的概念，以及流式技术如何发展和变化。

下面从《Current Protocols in Cytometry》 (2005) 1.3.1-1.3.21中摘录并翻译一些术语，分享给FLOWER，无论您是否新手，这些概念都受益匪浅，尤其对于流式抗体的临床验证，更是不可或缺。

精度（Accuracy）
测量值与真实值或期望值一致的程度。

校准微球（Alignment Particle）

具有均匀尺寸、荧光和光散射特性的微球，用于检查流式细胞仪中激发和发射光学元件的是否对准了。校准微球应当在在所有检测器通道中都能发射荧光，这样才能同时检查所有通道。 当微球信号荧光强度最大而CV值最小时，说明光学器件的校准是最佳的。 颗粒越均匀，误差越小。良好的校准对于测量DNA是非常关键的，因为细胞之间的DNA含量相差非常小，没有足够的精度无法反映出细微变化。

抗体结合能力（Antibody binding capacity，ABC）

在饱和染色条件下可以与细胞结合的特定类型的抗体的数目。

自发荧光（Autofluorescence）

来自未加入染料或荧光素的细胞或颗粒的固有荧光。 人工制备的微球（例如塑料个珠）具有与淋巴细胞相似的自发荧光水平。上图中，FITC阴性样本中，同样具有与左侧阳性细胞一样的斜向峰，说明阳性样本中，斜向这群就是自发荧光。

背景（噪声、荧光、散射）
Background (noise, fluorescence, scatter)
当样品流中没有颗粒时却仍存在的信号。
背景噪声是限制荧光检测灵敏度的一个因素（见下面的荧光灵敏度和光散射灵敏度的定义）。根据试图检测的信号的低限不同，背景信号会有不同的主要来源。分别举例：
当激光器关闭，或流动室没有光激发时，检测器噪声是主要的背景信号来源。
对于光电倍增管（PMT），检测器背景噪声被称为暗电流，主要来自光电阴极的电子的随机发射。
对于光电二极管和其他固态检测器，主要来源于倍增器。
荧光噪声源包括：
水和光学元件的拉曼散射
来自样品或鞘流中未结合的荧光染料、试剂或污染物的荧光
光学组件的荧光

校准（Calibration）
调整仪器，以使分析结果的物理测量更准确。

变异系数（Coefficient of variation，CV）

用于测量值分布宽度的统计学评估，CV＝标准差／均值。

对照样本（Control  Sample）
与实验组或未知样品相同或几乎相同的方式制备出来的样本，应当给出预期的预定结果。
在免疫荧光分析中，阳性对照样品可以使用已知表达某标记的细胞，并与测试样品相同的抗体试剂。 阴性对照样品可以使用测试细胞，但不使用抗体试剂或使用不相关的抗体试剂。
流式中文网补充：

这种不加抗体的阴性对照，不太推荐用于设门，设门的最佳对照是生物阴性对照，就是说肯定不表达该标记的同类细胞，当然，实在找不到，可用标记正确同型对照，并且事先经Fc Block的阴性样本作为设门参照。更多内容，请点击菜单〖我〗－〖流式中文网手机版〗，然后搜索〖对照〗

－－To Be Continued－－

niwanmao

今天继续下半集。很多FLOWER可能都放假了，而我还在上班，所以这些内容会继续，让大家在放假放松的时候，以轻松的方式充点电。

《Current Protocols in Cytometry》 (2005) 1.3.1-1.3.21中摘录并翻译一些术语，同时从网络搜集一些精彩配图，以图文并茂的方式分享给FLOWER，无论您是否新手，这些概念都受益匪浅，尤其对于流式抗体的临床验证，更是不可或缺。

检测限（Limit of detection）
样品中可以检测但不一定可精确测定的最低分析物含量。

定量限（Limit of quantitation）
样品中在规定的实验条件下以可接受的精度和准确度定量测定的分析物的最低量。简单地说，就是这个检测得到的最低值是有足够的精确度，可用于判断结果的。

流式中文网补充：

这两个概念可以放在一起聊聊，按照我的理解，LOD指的是理论可能达到的最低值，但由于过低，可能精度上无法保证，而LOQ指的是实际能达到的最低值，这个最低值是有足够的精度和准确度做保障的，所以可用于结果判断。所以LOQ都是大于LOD的。

在流式检测MRD的时候，有时候为了简便起见，LOD和LOQ用下列公式计算：
LOD＝30/获取的细胞总量
LOQ＝50/获取的细胞总量

在实际计算定量指标的LOD和LOQ时，可使用Excel对一系列浓度梯度进行线性拟合，得到方程Y=aX＋b，那么：
SE＝（在Excel中利用数据分析－回归，统计表中得到）
SD＝SE×浓度梯度样本数量的平方根
LOD＝3.3×SD/a
LOQ＝10×SD/a

详细分析我帮大家从油 ×管 上找来了，见下面的视频：
https://imgcache.qq.com/tencentvideo_v1/playerv3/TPout.swf?max_age=86400&v=20161117&vid=k03692psgsu&auto=0


等效可溶性荧光染料的分子（MESF，molecules of equivalent soluble fluorochrome）
测量来自荧光颗粒的信号等于来自溶液中已知数目的分子的信号的颗粒荧光。 这对于希望准确检测细胞表面有几个目标分子的时候十分有用，目前有商品化的荧光定量微球。

精度或重复性（Precision or reproducibility）
同一事物的重复测量彼此一致的程度。 在流式细胞术中，通过在测量具有非常均匀特征的颗粒（生物或非生物）样品时获得的CV估计测量的精度。
－－EOF－－