各类流式样本处理时的注意事项

niwanmao

今天总结一下各类流式样本在处理时需要注意哪些事项，可能不一定全面，供参考备忘。

1、全血

全血是最常用、最易采集的样本。

• 抗凝剂需注意你要检测的抗原是否容易受抗凝剂中的某种成份，例如某些克隆号的CD41抗体易受EDTA影响，CD138易受肝素影响。
• 裂解液有些抗体可能会受固定剂的影响，这些抗体就需要避免使用含固定剂的商品化裂解液，改用自配的氯化铵裂解液（配制参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-206-1-1.html）。绝大多数情况下，裂解效果都不大有问题，但在某些病理性标本和一些鸟类标本中，可能裂解不好。
• 血浆中干扰抗体结合的物质比较典型的例子就是B细胞表面的轻链检测，由于血浆中存在大量的免疫球蛋白，结合了轻链抗体，导致检测出来假阴性，所以检测B细胞表面轻链前，切记用温的等渗缓冲液（PBS等）洗涤3次（J. Immunol. Meths. (1992) 151:123）。
  
  

2、PBMC

外周血单个核细胞（PBMC）是一些科研实验中经常用的材料，是利用Ficoll从全血中提取得到，主要为淋巴细胞和单核细胞。

• 如果你需要检测粒细胞等多形核细胞，就需要避免用PBMC。
• 存在丢失细胞的风险。
  
  

3、细胞株

细胞群体单一，但需注意细胞传代次数过多，导致细胞性质变化，抗原表达漂移。

4、实体组织悬液

实体组织样本可能是淋巴结、脾脏、肝脏、皮肤、肺等等。

• 对于容易研磨的组织（淋巴结、脾脏、肝脏等），建议使用物理研磨方式，尤其是流式中文网开发的魔滤，配合温和的细胞保存液，可得到十分完整而大量的细胞悬液，完整保留抗原，已经过多方测试，可参考：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5570-1-1.htmlhttp://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5331-1-1.html
• 对于不易研磨的组织，可先采用酶消化，再配合研磨进行。
  
  
  

5、其它注意事项，与标本类型无关

• 你要检测的靶标表达在细胞表面还是胞内，或是核内？
• 你要检测的分子是分泌性分子吗？如果是，需先用转运抑制剂（例如莫能霉素或Brefeldin A）抑制转运。
• 需注意某些细胞表面分子也具有胞内位点，例如CD3、CD79。
• 检测胞内分子，经典的方法是用多聚甲醛固定、皂素破膜。为了检测核内分子，有时候甚至还需要进一步用甲醇破核膜。目前有不少商品化破膜剂可以使固定破膜一气呵成，流式中文网也研发出了一款MemMagician新型破膜剂，对FSC影响小，减少处理时间，效果好，目前1元领取MemMagician®新型破膜剂10Test试用装（特惠放送，每人限一份）正在进行中（参见http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-5637-1-1.html）。
• 对照设置：FMO对照——用于多色实验调节补偿，设门。阳性对照——确定试剂性能良好。
  
  

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