PE标记抗体可否与protein A结合

saureus

请问一般的荧光素PE标记抗体  是标记抗体的什么位置
是否影响抗体的Fc片段与protein A的结合
想用BD这个抗体检测金葡菌表面的Protein A，不知是否可行

                               
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另外：
倪老师，请问流式细胞仪检测细菌效果如何？

niwanmao

PE标记的是抗体哪个位置，这个我倒是没有研究过，可能生产抗体的公司技术人员会比较懂。

细菌的活力检测有很多选择：例如PI、FDA、TO-PRO-3、SYTOX系列、CTC、DiOC2(3)等。但需要注意的是，这些染料相互之间的结果不完全一致，而且与CFU培养没有相关性。这是由于染料标记的是细胞死亡的间接信号，如膜完整性、代谢活性或膜极性等，而不同染料的原理有所不同。
其中的Live/Dead染细菌的实例可参见：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-2262-1-1.html
相关Protocol参见：
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1309-1-1.html
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-1311-1-1.html

关于金黄色葡萄球菌检测，对于非特异性细菌染色，SYTO BC和FM-4-64比较好。DAPI、Nile Red A也不错。
对于特异性检测，用针对金黄色葡萄球菌表面蛋白的标记抗体，如蛋白A，应该是可行的。

网上看到来自Uppsala University的Christer Malmberg的经验是：
第一：确保使用0.2μm过滤的培养基培养细菌，否则培养基包含大量的碎片会影响结果。在测量之前直接用0.2μm过滤的PBS稀释细胞培养物，或离心和洗涤。
第二：流式细胞仪的类型很重要。我遇到的大多数流式细胞仪是为真核细胞，比细菌大1000倍。因此，需要仔细调整，FSC或SSC阈值。如果用专门的小颗粒检测的流式细胞仪最好。
第三：最好使用SSC阈值，并且将阈值设置得低一点。细菌峰通常是噪声峰的一部分，这就是为什么标记是至关重要的。我用SSC / FL点图开始我的分析，用这种散点图与阴性对照比较时，细菌峰容易被发现。
第四：如果分离细菌很困难，使用乙醇灭活细菌和PI染色（在活/死的工具包） - 这种染料是真的很强，你会在调节PI增益后很容易发现细菌的峰值。固定后的细菌与活细菌大小相似，因此对比后，您将知道活细菌的峰在哪里。

saureus

niwanmao 发表于 2017-2-22 13:58
PE标记的是抗体哪个位置，这个我倒是没有研究过，可能生产抗体的公司技术人员会比较懂。

细菌的活力检测 ...

谢谢倪老师的分享，真是学到了很多知识！