总说滴定，你滴一个给我看看

niwanmao

我们经常说抗体使用之前，一定要滴定，得到一个最佳用量，这样标记出的结果漂亮又节省抗体。但实际上，很多FLOWER可能会觉得滴定要做这么多梯度，太浪费抗体，于是作罢。

滴定具体怎么做呢？Current Protocols in Cytometry里面6.29.1章节给我们提供了详细的操作步骤，流式中文网在此编译并进行了优化调整，分享如下。

材料
待滴定的荧光标记抗体
目标细胞（如果含红细胞，事先裂解红细胞。有核细胞悬液浓度～2×10E8/ml）
磷酸盐缓冲液（PBS）
1.2ml EP管
2ul、10ul、20ul、100ul、200ul、1000ul枪头
流式管
流式细胞仪

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这样下来，你了解如何进行最佳滴定了吗？

niwanmao

瓜子-V 发表于 2018-5-8 13:07
抗体滴定的时候如果没有阴性群，该如何处理？例如在调整二抗浓度时？

如果全阳性，可加入未染色的同种细胞，进行调节。

yuanli

老师：如果要是直方图分析的话，怎么判断最佳滴定？另外信噪比怎么计算啊？比如在calibur机器中cellquest软件的分析中是哪些值计算信噪比呢？

niwanmao

yuanli 发表于 2017-3-7 15:45
老师：如果要是直方图分析的话，怎么判断最佳滴定？另外信噪比怎么计算啊？比如在calibur机器中cellquest软 ...

信噪比的计算方法站内可搜索，跟软件无关。
直方图在某些情况下可以区分，但仍然建议用前述散点图形式会圈得更精确。

毛豆24821

老师，请教您一些问题，关于分群延伸程度最长的就是最佳抗体用量，有什么具体数据指标吗，还是只可以肉眼识别。另外，一般抗体滴定时，超出什么浓度范围，可以初步判断抗体的特异性不行。谢谢

niwanmao

毛豆24821 发表于 2017-11-16 15:38
老师，请教您一些问题，关于分群延伸程度最长的就是最佳抗体用量，有什么具体数据指标吗，还是只可以肉眼识 ...

肉眼可以看。如果希望客观一些，可以用染色指数：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-4548-1-1.html

瓜子-V

抗体滴定的时候如果没有阴性群，该如何处理？例如在调整二抗浓度时？

iscience

我想学习一下

chennai

赞一个赞一个我想看啊

骑猪上高速

倪老师，因为日常中都是全血孵育抗体后才溶血的，所以进行抗体浓度滴定时，使细胞浓度在10的6次方是包不包括红细胞的？