老鼠神经元细胞分选问题

zoeyyang · 发表于 2017-3-29 10:12:17

给用户分选转基因老鼠神经元细胞，分选下来的细胞状态非常差，上流式前显微镜下自带荧光非常强，分选下来之后，显微镜观察荧光弱了很多。而且细胞状态很差，很快就破裂死了。这是怎么回事？

happyeday · 发表于 2017-3-29 10:12:18

据说用全血清润洗一下，即使有细胞到了管壁上，也可以最后收集回来。一般是装满血清，4度过夜，上机前倒掉（这个还可以再配培养基什么的，不浪费），加含双倍抗生素的培养基收集。我上次分选采用的是100um的喷嘴。

zoeyyang · 发表于 2017-3-29 10:29:32

荧光是细胞自带的红色荧光蛋白tdTomato。之前有怀疑是不是鞘液的问题，但是直接用鞘液重悬细胞，也没有问题。

happyeday · 发表于 2017-4-5 13:42:34

是分单个细胞吗？还是分整管？

zoeyyang · 发表于 2017-4-6 12:51:00

happyeday 发表于 2017-4-5 13:42
是分单个细胞吗？还是分整管？

是分整管的细胞。

happyeday · 发表于 2017-4-7 09:20:47

那会不会是你的样品和鞘液之间的压力差太大了？接收管没有事先用血清润洗过夜？或者鞘液对于这种细胞来说不合适？我以前分的神经细胞，单个的不好活，但整管的没有问题。

zoeyyang · 发表于 2017-4-7 11:19:48

happyeday 发表于 2017-4-7 09:20
那会不会是你的样品和鞘液之间的压力差太大了？接收管没有事先用血清润洗过夜？或者鞘液对于这种细胞来说不 ...

很高兴看到你的回答。鞘液试过了，重悬细胞没有问题。样品与鞘液压力，这个还好，不过下次实验我会更注意一些。接收管血清润洗过夜？百分百血清吗？这个没有准备，接收管用的是1.5ml的ep管，接之前用接收液体（含百分之十的血清的pbs）润洗了一下管壁。对分选神经细胞，你还有什么具体的建议吗？

zoeyyang · 发表于 2017-4-11 06:27:38

happyeday 发表于 2017-4-10 11:09
据说用全血清润洗一下，即使有细胞到了管壁上，也可以最后收集回来。一般是装满血清，4度过夜，上机前倒掉 ...

嗯，非常感谢。下一次我试一下你的方法。

happyeday · 发表于 2017-4-12 11:02:43

不客气，都是在交流中学习

zoeyyang · 发表于 2017-4-13 11:28:54

happyeday 发表于 2017-4-12 11:02
不客气，都是在交流中学习

你好，之前分选找不到活细胞，我们担心是机器管道的问题，所以准备了其他细胞相同条件下昨天做了分选，但是发现细胞分选前后差别不大。咨询过仪器工程师，他们觉得有可能之前分选的神经元细胞在分选前，细胞就已经处在早期凋亡的状态了。所以我们担心是准备细胞重悬样品过程出现问题。细胞处理过程，用户参照的是一篇文献的protocal“FACS purification of immunolabeled cell types from adult rat brain”不知道你对样品处理过程，有什么需要注意的地方或是建议吗？

账号		自动登录	找回密码
密码			加入流式中文网

[其它] 老鼠神经元细胞分选问题

最佳答案