鞘液太贵，我可以用什么来代替？

niwanmao

许多实验室使用磷酸盐缓冲液（PBS）作为鞘液，有些是自己配制，有些是从公司购买，但实际上由于鞘液只是起到包裹样本作用，细胞在通过流式细胞仪时，并不会因为鞘液渗透压不对而死亡，所以没有必要用PBS。完全可以用蒸馏水代替。如果担心蒸馏水长菌，可以用含0.1％的2-苯氧基乙醇的水，既可防腐，又有表面活性剂的去污能力。

不过，对于流式分选仪，则必须使用缓冲盐溶液作为鞘液。除了PBS，10 mM HEPES缓冲盐溶液在分选上可能会表现更好。

如果你的细胞是用培养基制备和重悬的，那么用HEPES就更合适了。

10X的HEPES配制方法如下：
- 13.015g HEPES钠盐
- 11.915g HEPES自由酸
- 80g NaCl
调节pH至7.2-7.4，终体积为1升。

xiaoguo521521

鞘液用PBS和HEPES时间久了会有盐类残留吧！

niwanmao

xiaoguo521521 发表于 2017-4-7 15:36
鞘液用PBS和HEPES时间久了会有盐类残留吧！

是的。用含防腐剂和去污成份的水更好。

hellenli

去年打报告的时候做了一份比较，大家可参考
鞘液的质量参差不齐一方面直接影响分选后细胞活力，另一方面，也将影响仪器管路、滤器等使用寿命，将增加后期设备维护成本。为此，我们查阅相关资料，及对比其他有经验的研究室流式所用鞘液的情况，最后情况有如下三种：

通过上述比较，在保证仪器管路通畅，减少滤器损耗，保证分选质量及减少人力成本的前提下，我们选择购买Gibco品牌PBS粉末及相应灭菌耗材。当然不考虑价格，买商品化的鞘液是最好的

niwanmao

hellenli 发表于 2017-4-10 14:00
去年打报告的时候做了一份比较，大家可参考
鞘液的质量参差不齐一方面直接影响分选后细胞活力，另一方面， ...

我相信，在流体上面，可能专用鞘液会更有优势，因为其液体粘度、密度肯定都专门研究过的。

不过大多数应用问题不太大。PBS我总觉得还是不太建议用。

hellenli

niwanmao 发表于 2017-4-10 14:16
我相信，在流体上面，可能专用鞘液会更有优势，因为其液体粘度、密度肯定都专门研究过的。

不过大多数应 ...

16参加ISAC培训的时候，Paresh Jain认为应该用DPBS，我最近半年一直在用PBS认为对细胞活性影响不大。只是不要用非专用的商品稀释液，像我之前用的血细胞稀释液（磷酸盐、生理盐水、防腐剂等）分选完细胞不贴壁，大部分活性都不好了。

niwanmao

hellenli 发表于 2017-4-10 15:22
16参加ISAC培训的时候，Paresh Jain认为应该用DPBS，我最近半年一直在用PBS认为对细胞活性影响不大。只是 ...

分选确实需要注意的细节特别多，分析还好一些。

hellenli

niwanmao 发表于 2017-4-10 15:27
分选确实需要注意的细节特别多，分析还好一些。

专用鞘液真是太贵，运费都要一两百/20L。我分析就用双蒸水了，普通分选就用过滤的一般PBS或者非专用的商品缓冲液，无菌分选就用BD（BC）专用鞘液或者GIBCO的PBS了。一般的PBS一定要用0.22微米的滤膜过滤，毕竟一个鞘液滤器就要几大千，3个月到半年一换还是换不起的。