转染后细胞带GFP荧光，想做凋亡选了APC-PI可是还是有问题.....

huanranyixin · 发表于 2017-4-10 15:05:33

我的细胞转染了质粒，里面带有很强的GFP，使用过PE-7AAD，效果不好，之后换成了APC-PI但我觉得还是有问题，又不知道出现在哪里，请老师指点。@niwanmao

未染色细胞

PI染色

APC染色

双染

图片顺序分别是：未染色，PI染色，APC染色，双染。细胞都是带有GFP

调节补偿之后的图片，顺序和上面一样。
样品是没有加药处理的，PI怎么染上这么多细胞?这个门我也不知道设的对不对。请老师指点

huanranyixin · 发表于 2017-4-11 08:54:18

没有人帮我解答一下吗？

774055480 · 发表于 2017-4-11 09:16:56

PE-7AAD？APC-PI？是什么意思？

huanranyixin · 发表于 2017-4-11 13:45:04

774055480 发表于 2017-4-11 09:16
PE-7AAD？APC-PI？是什么意思？

APC染早凋，类似PE就是激发光不一样，接收也不一样

774055480 · 发表于 2017-4-11 15:32:03

个人觉得你的样本有些问题，PI染上那么多，而且凋亡单染管集体右移，没有阴性群。有可能是你样本处理过程中细胞慢慢的死掉了吧

huanranyixin · 发表于 2017-4-11 16:27:58

774055480 发表于 2017-4-11 15:32
个人觉得你的样本有些问题，PI染上那么多，而且凋亡单染管集体右移，没有阴性群。有可能是你样本处理过程中 ...

我也觉得奇怪，为什么单染没有明显的分群？PI还染上那么多，可是处理细胞方法不都一样吗

niwanmao · 发表于 2017-4-11 19:53:05

huanranyixin 发表于 2017-4-11 16:27
我也觉得奇怪，为什么单染没有明显的分群？PI还染上那么多，可是处理细胞方法不都一样吗 ...

这个是什么机器？好奇怪未设门时，那些百分比都是百分之1万多。

你的问题我还是没理解，是想问什么？

huanranyixin · 发表于 2017-4-12 08:59:38

niwanmao 发表于 2017-4-11 19:53
这个是什么机器？好奇怪未设门时，那些百分比都是百分之1万多。

你的问题我还是没理解，是想问什么？ ...

这个是默克公司的仪器，我想知道真正的APC-PI做凋亡出的图是怎样的？我选这两种染料做这个实验对吗？其他染料分区很明显，这个怎么在一条竖线上？

a86856635 · 发表于 2017-4-12 13:26:19

GFP有调补偿吗，是否细胞消化过度了

niwanmao · 发表于 2017-4-12 19:28:13

huanranyixin 发表于 2017-4-12 08:59
这个是默克公司的仪器，我想知道真正的APC-PI做凋亡出的图是怎样的？我选这两种染料做这个实验对吗？其他 ...

正常的Annexin V APC肯定会有荧光的，所以你这里没有荧光，是不是有可能通道选择有问题？你们实验室有没有其它机器，可以对比一下。以前出现过提这种问题的。

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