用流式区分死菌和活菌，有些细胞荧光信号太低，该怎样...

huyingxin · 发表于 2017-4-12 13:20:02

各位大神好，我最近在用流式区分环境样本中的死菌和活菌，所用的染料为PI和SYTO 9，但是有些颗粒（不知道是细菌还是杂质）的信号在0刻度附近甚至为负值（具体见下图，已用FlowJo调节过补偿），请问该怎么解决呢？
流式.png

niwanmao · 发表于 2017-4-12 13:20:03

huyingxin 发表于 2017-4-12 20:05
我现在就是觉得有很多颗粒显示的PI荧光强度为负值，这是因为我电压没调好吗？ ...

那是电压问题，在分析软件里面用Logicle算法调节出来就行，没关系的。

niwanmao · 发表于 2017-4-12 19:25:46

应该这么划分吧？

huyingxin · 发表于 2017-4-12 20:02:47

niwanmao 发表于 2017-4-12 19:25
应该这么划分吧？

左上角的那团应该是DEAD，SYTO染料对于死细胞和活细胞还是有一定区分度的，死细胞会和SYTO染料结合能力弱一些

huyingxin · 发表于 2017-4-12 20:05:57

niwanmao 发表于 2017-4-12 19:25
应该这么划分吧？

我现在就是觉得有很多颗粒显示的PI荧光强度为负值，这是因为我电压没调好吗？

huyingxin · 发表于 2017-4-13 15:01:04

niwanmao 发表于 2017-4-12 20:12
那是电压问题，在分析软件里面用Logicle算法调节出来就行，没关系的。

Logicle算法调节是指坐标轴的刻度选为双指数biex对吗？谢谢站长回答

niwanmao · 发表于 2017-4-13 19:00:16

huyingxin 发表于 2017-4-13 15:01
Logicle算法调节是指坐标轴的刻度选为双指数biex对吗？谢谢站长回答

是的，Logicle＝Biexponential

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