再谈同型对照：是该放弃这过时的东西了

niwanmao

同种型对照是与目标抗体有着相同重链和轻链，仅仅是靶点不同的抗体。真正匹配的同型对照除了要物种、亚型（IgG1、IgG2a、IgG2b等）一致，还需要有着相同的非特异性结合能力、浓度、荧光素:抗体比。所以说，要找到一个正确的同型对照，比你找到一个男/女朋友可能还要难。

同型对照真的这么重要吗？

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综上，以前认为同型异型对照可以显示出背景或非特异性结合，这个假设是应该被否定的。 如果文章评审因为缺少同型对照而拒绝您的论文，你现在可以用前面这篇文章来反驳他了。 同样地，如果有人正在使用同种型对照来确定背景染色水平，把这篇文章给他们看，耐心地劝说他们，用同型对照实在浪费时间和金钱。

参考源：

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/27731950

zj8237277

ps654321 发表于 2017-5-22 21:28
有个请教，单一细胞株，比如要验证CD20+，利用Fc，
设组：
1、空白细胞+Fc阻断剂（这里阻断剂能否去掉？）

阻断剂不能去掉。

为何不可以去掉呢？ 空白细胞上又没染染料，上流式也不会发光，加阻断剂也不是为了阻止自发荧光？ 为何还要多加阻断剂呢？

ps654321

有个请教，单一细胞株，比如要验证CD20+，利用Fc，
设组：
1、空白细胞+Fc阻断剂（这里阻断剂能否去掉？）
2、CD20 PE+Fc阻断剂

是否这是正确使用Fc阻断剂的方式？因为看了

就是说，你在单标时，使用空白细胞＋阻断剂，即可代替以前苦苦追寻的同型对照

有点疑惑

niwanmao

ps654321 发表于 2017-5-22 21:28
有个请教，单一细胞株，比如要验证CD20+，利用Fc，
设组：
1、空白细胞+Fc阻断剂（这里阻断剂能否去掉？）

阻断剂不能去掉。

家的感觉

弱弱的问一下，一般不是可以利用同型对照来设门吗，为什么“图2”中加了同型对照后，设门位置就不对了呢？却还是以空白对照的位置来设门，而不能以同型对照来设门呢？谢谢！

mingxu95

除了商品化的阻断剂，我看血清也可以，那么做猴子的细胞最好用猴的血清做阻断剂吧？

mingxu95

还有，商品化的Fc阻断剂贵吗，还没用过

niwanmao

家的感觉 发表于 2017-5-23 08:39
弱弱的问一下，一般不是可以利用同型对照来设门吗，为什么“图2”中加了同型对照后，设门位置就不对了呢？ ...

请仔细看帖，同型对照是祖传的观念，并且可以说90％以上的同型对照都是没选对的，因为谁都没有验证过非特异结合能力、荧光：抗体比等等是否一致，只是厂家说是就是。实际上Fc阻断就已经代替掉了同型对照的作用。

niwanmao

mingxu95 发表于 2017-5-23 09:01
还有，商品化的Fc阻断剂贵吗，还没用过

商品化的Fc Blocking solution是偏贵的，可以考虑AB型血清。如果是猴子，我记得猴子应该也
是有血型的，可能也需要注意血型，否则细胞要被血清中的血型抗体破坏。

cneagle

学习了，一直在对做不做同型对照矛盾着，丹麦的科研人员是有心人，楼主也是有心人

zj8237277

同型对照可以消除自发荧光，FC受体介导的抗体结合，非特异性抗体结合。。。而Fc阻断只是消除了FC受体介导的抗体结合