RAW264.7流式检测

yelinghao215

我是将RAW264.7细胞接种于6孔板中培养24小时后分别加培养基、LPS和药物处理的，处理24小时后用细胞刮收集孔内的细胞然后加抗体进行流式测定，结果发现RAW264.7在流式检测的时候分了两群细胞，而且LPS处理的RAW264.7细胞与其他细胞分群差异很大，不知道是什么原因，求解答，谢谢~

niwanmao

左侧这类是凋亡细胞和碎片。LPS刺激后细胞增大是正常的。所以如果细胞不纯粹的话，一般建议用特异性分子设门。

yelinghao215

niwanmao 发表于 2017-5-28 18:54
左侧这类是凋亡细胞和碎片。LPS刺激后细胞增大是正常的。所以如果细胞不纯粹的话，一般建议用特异性分子设 ...

谢谢，我还想问一下用胰蛋白酶消化细胞会不会影响细胞表面抗原的流式检测呢？细胞刮好像会产生很多碎片。

niwanmao

yelinghao215 发表于 2017-5-29 13:26
谢谢，我还想问一下用胰蛋白酶消化细胞会不会影响细胞表面抗原的流式检测呢？细胞刮好像会产生很多碎片。 ...

贴壁细胞的处理确实是难题，很多人都处理不好，我实话说也没什么经验，只能根据平时给研究生做的这点经验，似乎是胰酶消化更好一点，但关键在于酶浓度和消化时间的控制和及时中止上。

yelinghao215

niwanmao 发表于 2017-5-29 16:56
贴壁细胞的处理确实是难题，很多人都处理不好，我实话说也没什么经验，只能根据平时给研究生做的这点经验 ...

好的，多谢多谢~

a86856635

胰酶消化是有水解表面蛋白的可能，贴壁不牢的细胞可以用单独的EDTA进行消化。对于RAW这种贴壁很牢的细胞用accutase，dispase这类的酶消化应该会好些，或者用低吸附的孔板培养

yelinghao215

a86856635 发表于 2017-6-2 17:44
胰酶消化是有水解表面蛋白的可能，贴壁不牢的细胞可以用单独的EDTA进行消化。对于RAW这种贴壁很牢的细胞用a ...

谢谢您的解答