我的小鼠CT26肿瘤组织TIL分析Treg图形有什么问题

jimm

各位老师和大神看看我的流式细胞Treg分析有啥问题？本人初学者，刚接触流式细胞仪器。

jimm

我的Treg怎么表达这么高呀？问题出现在哪里？

niwanmao

jimm 发表于 2017-6-7 09:55
我的Treg怎么表达这么高呀？问题出现在哪里？

我觉得你这个抗体组合有没有问题？为什么这么多CD45－的细胞？
正常情况下，所以的白细胞都是CD45＋的，另外，你没有用CD3设T细胞的门，这个不好，因为CD4弱表达可能是单核细胞，并非T细胞。

jimm

CD45-肿瘤细胞大概占77%多，CD45+大概占21%左右，没加上CD3，估计会影响Treg结果。

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我觉得FOXP3最好做个FMO的对照，不过看你foxp3明显分了俩群，看一下同型对照的图是不是也是俩群呢，之前没遇到过这么高的。肿瘤组织组非特异性染色很重，还是需要染个CD3的。

niwanmao

jimm 发表于 2017-6-7 11:19
CD45-肿瘤细胞大概占77%多，CD45+大概占21%左右，没加上CD3，估计会影响Treg结果。
...

我建议再画一幅散点图，看看所谓FoxP3＋的细胞在CD45是阴性还阳性？另外，再看一下所谓foxP3+的细胞在FSC/SSC图上在什么位置？

jimm

谢谢老师的分析，这个就是Foxp3+细胞在CD45+位置以及在FSC/SSC的位置图。

niwanmao

jimm 发表于 2017-6-8 09:28
谢谢老师的分析，这个就是Foxp3+细胞在CD45+位置以及在FSC/SSC的位置图。

这些都是死细胞为主，是假阳性。

jimm

可是我用了Live&dead染料去除死细胞了呀？组织单细胞悬液也用了percoll分离液纯化了，怎么还有死细胞干扰呢？

happypinger

请问能告诉我一样你的肿瘤样品是怎么处理的吗？越详细越好，非常感谢！