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流式也能测去年的流行病明星——Zika病毒

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发表于 2017-6-8 19:59:27 | 显示全部楼层 |阅读模式

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Zika病毒(ZIKAV)首先在乌干达的恒河猴中鉴定出来的一种节肢动物黄病毒病毒,自2007年起开始爆发的ZIKAV疫情,这就是罪魁祸首,去年的时候就新闻不断。

这种病毒通常会导致自限性感染,可以呈现为轻度发热性疾病或无明显症状。 然而,在极端情况下,ZIKAV感染的母亲,其生下的婴儿可出现神经系统并发症和先天性异常如小头畸形。

虽然对ZIKAV相关发病机制的研究很重要,但对ZIKAV诊断的努力仍然至关重要。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)是大多数实验室的选择方法,阳性即可确诊急性ZIKAV感染。然而,由于疾病症状轻微,相当多的患者无症状,因此患者寻求医疗护理时,病毒血症期可能已经结束,这时PCR反而未必能够测的出来。另一方面,血清学诊断的使用仍然受到抗体与其他种类地方性黄病毒发生频繁交叉反应性的限制。

因此,有必要建立识别活性病毒感染的替代、互补的检测方法,例如检测ZIKAV非结构蛋白存在。虽然ZIKAV感染人类全血中哪类细胞尚未得到明确,但已经证明髓系细胞是一个可能性非常大的细胞靶点。

因此,新加坡的Fok-Moon Lum等人检测Zika病毒感染患者外周血单核细胞中ZIKAV NS3蛋白,发现可以很好地起到筛查和补充诊断作用。

方法还是有点复杂的,因为作者的抗体是自己制备的,他们采用ZIKAV的NS3蛋白序列,转进大肠杆菌,表达出的重组蛋白打入兔子体内进行免疫,制备NS3单抗。

全血标记的时候,先标记CD45和CD14,然后进行固定破膜,标记感染单核细胞胞内的Zika病毒NS3蛋白,故最后的分析如下图,设门是采用20例正常人确定阴性阳性分界位置:
屏幕快照 2017-06-08 下午6.05.39.png

作者将患者单核细胞中检测到的ZIKAV NS3抗原表达率人为分为3组:
高表达(> 40%阳性)
中等表达(10-40%阳性)
低表达(<10%阳性)

发现急性期和恢复期部分患者均可检测到高表达的抗原,这些被病毒感染的单核细胞很可能是后续神经系统损害的原因。
屏幕快照 2017-06-08 下午7.45.32.png

在目前基因至上的时代,流式有很多可以补充甚至快速替代的作用,除了这个,你还想到什么?

参考源:
Fok-Moon Lum, Cui Lin, Olga Y. Susova, Teck-Hui Teo, Siew-Wai Fong, Tze-Minn Mak, Linda Kay Lee, Chia-Yin Chong, David C.B. Lye, Raymond T.P. Lin, Andres Merits, Yee-Sin Leo, Lisa F.P. Ng; Sensitive detection of Zika virus antigen in patients’ whole blood as an alternative diagnostic approach. J Infect Dis 2017
发表于 2017-6-9 18:01:29 | 显示全部楼层
本帖最后由 hbezyr 于 2017-6-9 18:04 编辑

这门划的,背景也是太高了,要不比较MFI才好?

另外,moderate组的cd14比例与其它各组相比也差太多了吧?做了不少病例,不能给出个好一点的代表性图?

这种检测只能是说发文章而已了。病毒检测,核酸检测已经很快了,还有一些临床的症状。如果作者能比较他们的方法和核酸检测之间的关系,再比较与不同,或是用这种流式方法检测出ziks新的感染机制之类的,或许更有意义。


最后,如果是做出带GFP病毒来作为研究,更有通用性,当然,这就是另外的事情了。

当然,吐槽容易,有新的发现和应用还是好的。
 楼主| 发表于 2017-6-9 20:08:35 | 显示全部楼层
hbezyr 发表于 2017-6-9 18:01
这门划的,背景也是太高了,要不比较MFI才好?

另外,moderate组的cd14比例与其它各组相比也差太多了吧? ...

呵呵,是的,这样的分群在比例分析上确实会存在一定问题,不过他们如果以正常人单核细胞作为正常阴性对照,倒问题不会太大。

至于单核细胞比例我倒觉得不是问题,毕竟不同病人,单核细胞比例之间差异大是很正常的。
病毒检测和核酸检测是确诊的金标准,但是流式还是要快很多,而且可以进行初筛,这个意义应该还是大的。

这篇文章的意义就在于,避免病毒血清学检测的假阴性(因为Zika病毒感染的特殊性),并且可以快速筛查出病人。
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