奇怪的周期倍体

ogm

大家帮忙分析分析细胞周期图，这两个峰是2N和4N吗？看着峰形有点不对。以下是本实验相关信息：肿瘤细胞系、250g、70%乙醇固定过夜、买来现成的PI染液，按说明染色15分钟。

niwanmao

倍体参照很重要，没有倍体参照这样猜很难。如果实在搞不到，就想办法弄一个正常人外周血，用同样的步骤、同样的电压做一次，也可以大概有个数。

ogm

细胞没有经过任何药物处理，单纯是培养的肿瘤细胞且细胞活力也很好

ogm

niwanmao 发表于 2017-6-17 21:51
倍体参照很重要，没有倍体参照这样猜很难。如果实在搞不到，就想办法弄一个正常人外周血，用同样的步骤、同 ...

谢谢倪老师的解答，老师能否帮忙提供一个血液做周期的protocol，谢谢

niwanmao

ogm 发表于 2017-6-18 14:57
谢谢倪老师的解答，老师能否帮忙提供一个血液做周期的protocol，谢谢

Protocol你现在用的应该没问题啊，看这几个散点图都还是不错的，关键还是倍体参照物，具体使用什么做参照，可在上面的搜索框里面输入“细胞周期”即可找到相关帖子，祝顺利！

ogm

niwanmao 发表于 2017-6-18 16:35
Protocol你现在用的应该没问题啊，看这几个散点图都还是不错的，关键还是倍体参照物，具体使用什么做参照 ...

倪老师好，我今天抽了点血做周期对照，取100ul抗凝血加入到2ml的NH4Cl裂解液中，裂解红细胞10mins，500g离心５mins，发现红细胞裂解不干净，管底还有残留。随后用2ml-20℃预冷的70%乙醇固定过夜，第二天500g 5mins离心，洗两遍，上机，基本上没细胞了，我这问题是出在哪啊？是血用量太少了吗？其实除了第一次裂解红细胞后离心比较明显看到细胞，后来步骤都没看到什么沉淀了

ogm

图片中是pbs洗了一次再离心的

niwanmao

ogm 发表于 2017-6-22 19:22
倪老师好，我今天抽了点血做周期对照，取100ul抗凝血加入到2ml的NH4Cl裂解液中，裂解红细胞10mins，500g离 ...

裂解不干净可能跟很多因素有关，如果裂解液配方没问题，那么可能跟血浆中的一些干扰物质有关，可以先洗涤2～3次再裂解。

至于固定后看不到细胞，可能是细胞被破坏了，可考虑固定时振荡乙醇，然后往乙醇中逐滴加入白细胞。次日离心速度降到400g试试。