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首次披露:商品化流式抗体批间差异究竟有多少?

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发表于 2017-6-22 20:28:19 | 显示全部楼层 |阅读模式

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这篇文章《Lot-to-lot stability of antibody reagents for flow cytometry》发表于2017年3月份,可能并不是第一篇公布批间差异值的文献(EuroFlow以前做过类似),但肯定是测试量最大的,7年时间共测了1323管各种荧光素的抗体。

这篇文章里面的数据可能给流式厂家和其他研究人员制定荧光染料标记单抗质量标准时提供一定参考。 同时,它提供了一个可行的工具来评估可比性,并确定连续批次的Mab试剂之间的潜在差异。

下图是此次测试1323管抗体总体的CV值分布,可见90%以上单抗CV值是在20%以内的:
屏幕快照 2017-06-22 下午7.49.36.png


不同荧光素,谁的批间差最小?

相同单抗连续不同批次之间的荧光强度批间差,90%以上的数据都不是超过20%的差异,所以在EuroFlow QA计划(Kalina et al.,2015)中,将批间CV <30%定义为性能最佳的。如果CV值更大也是可以接受的,但显然有可能对数据稳定性产生不利影响。

在文章中,作者认为批间差异取决于荧光染料,其中FITC观察到CV值最小,而PE标记的单抗批间较不稳定。 与FITC相比,PE的高度差异是有点出乎意料的,因为PE可以以特异的比例与单抗结合,因此被认为特别适合于定量流式细胞术。 另外,荧光素为PerCPCy5.5和APC的单抗,CV值也较大。而那些串联染料(如PE-cy7、APC-H7、APC-C750等)由于更复杂的标记过程,所以CV值大也是很正常的。详细结果见下表,比较时主要看表中的25%、75%值以及中位数:
屏幕快照 2017-06-22 下午7.49.04.png

因此,上述不同荧光素批间差不同,提示我们如果需要进行比较精确的定量,可能还是需要那些CV值小的抗体,可能荧光强度未必占优势,但长期稳定性更重要。



不同厂家的单抗
从不同供应商处购买的单抗,在批间稳定性方面存在显着差异,可能反映出不同制造商采用的生产和/或质量保证标准的差异。因此,如果要进行CD20定量等定量流式检测的话,还是最好从同一个厂家处购买同一荧光素单抗。


单抗混合之后,批间差是否会变?

如果你检测的时候需要使用8个或更多单抗,那么推荐采用抗体预混物,就是将8个抗体预先按照测试数量,混合在一起,然后再一个个Test分到各个流式管中,这不仅是省心省力,也是英国血液学标准委员会建议的(Johansson等,2014)。

作者发现,这些预混物,与单个单抗相比,对批间差没有影响。所以混合之后,对批间差无影响。

但是作者认为,应在制备单抗预混物之前,进行单个抗体批次稳定性测试。此外,还建议每次配制好新的预混物后,先染一个正常白细胞样本,并且由两名技术人员独立标记,以最大限度减少单抗预混物中遗漏或错加单抗的可能性。

接下来问题来了,单抗预混物可以保存多久?

在我们的经验中,只要单抗未到期,预混物可以稳定28天。但是不建议在预混物中包含串联染料PECy7、APCC750或APCH7标记的单抗,因为这些荧光素根据制造商描述需要特定的浓度下的稳定溶液才能保持稳定性。

看完之后,是否感觉一下子知道了很多?点个赞呗!

文献源:
Böttcher S,et al. Lot-to-lot stability of antibody reagents for flow cytometry.  J Immunol Methods 2017 Mar 30

点评

非常感谢,这些资料对我很有帮助: 5.0
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  发表于 2017-6-23 08:15
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