小白对于#同型对照#和#结果分析#的几个疑惑？

minazeng

1.流式分析时，（不是同时进行的实验）每次检测样本必须要有独立的同型对照？还是所有样本只做一个同型对照呢？
2.由第1衍生的另外一个问题：设好的门能否应用于不是同时进行的所有样品？
3.实验时已进行了多色的荧光补偿，最后分析结果时，如果因为最后不需要而去除其中一个荧光指标，会否影响其他已调补偿的荧光？
4.我的实验中主要应用iso和分群来设门，PE-A（图1）好像分群很不明显，可能因为阳性的太少？；但是，如果采用PE-H（图2），分群马上就明显了，究竟是什么问题呢？

niwanmao

1、设置Marker位置，建议用生物学阴性对照或FMO对照。
2、设好的门可应用于同种细胞、相似处理的所有样品。
3、分析结果时，不分析某个参数，不会对其它荧光发生荧光，因为数据已经定型了。
4、设门还是如第一点所说，用生物学阴性对照或FMO对照。至于你图中的A和H的不同，我考虑是粘连体造成，你可以切换成PE-A/PE-H散点图，看看就明白了。

上面回答中的FMO对照、粘连体等概念，可搜索站内资料。

minazeng

niwanmao 发表于 2017-6-24 09:02
1、设置Marker位置，建议用生物学阴性对照或FMO对照。
2、设好的门可应用于同种细胞、相似处理的所有样品。 ...

谢谢倪老师耐心解答

minazeng

minazeng 发表于 2017-6-24 15:24
谢谢倪老师耐心解答

E:\1

minazeng

niwanmao 发表于 2017-6-24 09:02
1、设置Marker位置，建议用生物学阴性对照或FMO对照。
2、设好的门可应用于同种细胞、相似处理的所有样品。 ...

倪老师，我认真拜读了您关于黏连体的贴，可是相同的细胞标志物，如果是FCS-H/FCS-A或PC7-H/PC7-A可以看得到大部分是单个细胞（无黏连体），但是PE-H/PE-A还是很奇怪（如图所示）。另外，图1A和图1B是同一次同一人的两份样品，但是图1A如果设门是所有细胞，PE-A和PE-H都有阳性群和阴性群，但如果设门是P5，PE-A只有单峰，PE-H却又双峰，图2虽然两种设门都有双峰，但是PE-H/PE-A得图形还是很奇怪，不知道到底哪些才是PE阳性表达的细胞……

niwanmao

minazeng 发表于 2017-6-24 20:11
倪老师，我认真拜读了您关于黏连体的贴，可是相同的细胞标志物，如果是FCS-H/FCS-A或PC7-H/PC7-A可以看得 ...

不知道你哪几个通道标记了荧光。
一般是这样的，排除粘连体基本上都是用FSC-A/FSC-H或SSC-A/SSC-H，然后分析的时候尽量用H指标。

zsyzx

倪老师，做流式多色分析，以未染色细胞设门效果不好，如果现在补充做FMO对照，FMO对照确定的门可以用于之前上机样品的分析吗？

niwanmao

zsyzx 发表于 2020-1-2 22:37
倪老师，做流式多色分析，以未染色细胞设门效果不好，如果现在补充做FMO对照，FMO对照确定的门可以用于之前 ...

电压一致，并且仪器质控参数稳定，从宽来说可以，但如果严格说，不可以。

zsyzx

niwanmao 发表于 2020-1-3 08:31
电压一致，并且仪器质控参数稳定，从宽来说可以，但如果严格说，不可以。 ...

好的，谢谢倪老师