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[淋巴细胞相关] 小白对于#同型对照#和#结果分析#的几个疑惑?

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发表于 2017-6-22 23:05:49 | 显示全部楼层 |阅读模式
悬赏5流星未解决
1.流式分析时,(不是同时进行的实验)每次检测样本必须要有独立的同型对照?还是所有样本只做一个同型对照呢?
2.由第1衍生的另外一个问题:设好的门能否应用于不是同时进行的所有样品?
3.实验时已进行了多色的荧光补偿,最后分析结果时,如果因为最后不需要而去除其中一个荧光指标,会否影响其他已调补偿的荧光?
4.我的实验中主要应用iso和分群来设门,PE-A(图1)好像分群很不明显,可能因为阳性的太少?;但是,如果采用PE-H(图2),分群马上就明显了,究竟是什么问题呢?


图1

图1

图2

图2
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发表于 2017-6-24 09:02:38 | 显示全部楼层
1、设置Marker位置,建议用生物学阴性对照或FMO对照。
2、设好的门可应用于同种细胞、相似处理的所有样品。
3、分析结果时,不分析某个参数,不会对其它荧光发生荧光,因为数据已经定型了。
4、设门还是如第一点所说,用生物学阴性对照或FMO对照。至于你图中的A和H的不同,我考虑是粘连体造成,你可以切换成PE-A/PE-H散点图,看看就明白了。

上面回答中的FMO对照、粘连体等概念,可搜索站内资料。
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 楼主| 发表于 2017-6-24 15:24:55 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-6-24 09:02
1、设置Marker位置,建议用生物学阴性对照或FMO对照。
2、设好的门可应用于同种细胞、相似处理的所有样品。 ...

谢谢倪老师耐心解答
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 楼主| 发表于 2017-6-24 19:59:00 | 显示全部楼层
minazeng 发表于 2017-6-24 15:24
谢谢倪老师耐心解答

E:\1
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 楼主| 发表于 2017-6-24 20:11:26 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2017-6-24 09:02
1、设置Marker位置,建议用生物学阴性对照或FMO对照。
2、设好的门可应用于同种细胞、相似处理的所有样品。 ...

倪老师,我认真拜读了您关于黏连体的贴,可是相同的细胞标志物,如果是FCS-H/FCS-A或PC7-H/PC7-A可以看得到大部分是单个细胞(无黏连体),但是PE-H/PE-A还是很奇怪(如图所示)。另外,图1A和图1B是同一次同一人的两份样品,但是图1A如果设门是所有细胞,PE-A和PE-H都有阳性群和阴性群,但如果设门是P5,PE-A只有单峰,PE-H却又双峰,图2虽然两种设门都有双峰,但是PE-H/PE-A得图形还是很奇怪,不知道到底哪些才是PE阳性表达的细胞……


图1A

图1A

图1B

图1B

图2

图2
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发表于 2017-6-25 15:01:20 | 显示全部楼层
minazeng 发表于 2017-6-24 20:11
倪老师,我认真拜读了您关于黏连体的贴,可是相同的细胞标志物,如果是FCS-H/FCS-A或PC7-H/PC7-A可以看得 ...

不知道你哪几个通道标记了荧光。
一般是这样的,排除粘连体基本上都是用FSC-A/FSC-H或SSC-A/SSC-H,然后分析的时候尽量用H指标。
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发表于 2020-1-2 22:37:45 | 显示全部楼层
倪老师,做流式多色分析,以未染色细胞设门效果不好,如果现在补充做FMO对照,FMO对照确定的门可以用于之前上机样品的分析吗?
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发表于 2020-1-3 08:31:46 | 显示全部楼层
zsyzx 发表于 2020-1-2 22:37
倪老师,做流式多色分析,以未染色细胞设门效果不好,如果现在补充做FMO对照,FMO对照确定的门可以用于之前 ...

电压一致,并且仪器质控参数稳定,从宽来说可以,但如果严格说,不可以。
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发表于 2020-1-5 12:31:29 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2020-1-3 08:31
电压一致,并且仪器质控参数稳定,从宽来说可以,但如果严格说,不可以。 ...

好的,谢谢倪老师
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