请教一下Blank组 同型对照 FMO 的相关问题

lgfffancy

老师：
你好。想咨询以下几个问题：
1）在做荧光补偿时，理论上来说需要blank管以及各单色管。但是为什么我看有些调补偿，根本没有blank管，只有单色管，特别是对于临床上的多色分析，这是为什么呢？
2）很多流式仪能够自动调节补偿，但是如果发现在检测时某一通道的补偿未调好的话，应该怎么办呢，可以不可以举例说明一下呀？
3）多色补偿调节好后，应用补偿数据到样本，这时需要精确圈门需要做FMO，比如（-）+PE+cy5PE+cy7PE           (FITC的FMO对照)，那我画图分析的时候应该怎么做呢？（突然很糊涂，画FITC分别与这三个荧光通道的图？然后我怎么确定FITC的阴阳性那根线啊，这样画了就有三根线了啊，confused..)

麻烦依依老师解答一下，感谢。
已参考http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&action=printable&tid=2221
http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=viewthread&tid=4404&highlight=%E5%90%8C%E5%9E%8B%E5%AF%B9%E7%85%A7

niwanmao

1、临床上，一般都是利用患者体内残留的正常细胞作为内对照，所以能够很方便地确定哪些抗原阳性，哪些阴性，然后补偿应该怎么样。所以一般不太需要单色调补偿。
2、自动调节补偿，还是基于单色管，而单色管大多是采用一个抗原＋不同荧光素，所以最后还是需要微调，微调的基本原则就是你所用样本的已知表达情况，所以就像临床上的内对照一样，必须要有一个已知表达的样本，你才能去微调。
3、既然是FMO，就根据FMO的边缘画线即可。

lgfffancy

niwanmao 发表于 2017-7-6 08:04
1、临床上，一般都是利用患者体内残留的正常细胞作为内对照，所以能够很方便地确定哪些抗原阳性，哪些阴性 ...

老师你好，我想追问一下
1.临床上如果做多色，如果需要调补偿的话，我们是不是需要准备单色管和blank管；  还是说仅仅只需要单色管就可以调补偿？
2.一般情况下，临床上做多色是不是直接所有抗体加进去染，不需要跑空白对照？
3.我不太理解FMO那条线怎样画，FITC与PE, FITC与cy5PE，FITC与cy7PE共有三条线，那选哪条做为FITC的阴阳性的线呢？（初接触，请多多包涵）

niwanmao

lgfffancy 发表于 2017-7-6 15:02
老师你好，我想追问一下
1.临床上如果做多色，如果需要调补偿的话，我们是不是需要准备单色管和blank管； ...

1、我前面说过了，是利用标本内部正常细胞作为调节补偿的对照，可以直接几个标记一起染，当然，如果新手，当然是可以用你说的单色管。
2、是的。
3、你这个问题我还是没看懂，设FMO的门，就是沿着其边缘设一个就行了呀。

lgfffancy

niwanmao 发表于 2017-7-6 19:26
1、我前面说过了，是利用标本内部正常细胞作为调节补偿的对照，可以直接几个标记一起染，当然，如果新手 ...

谢谢，老师对于第一个问题 临床上是不是可以直接多染调补偿，连正常细胞作对照也不需要？

niwanmao

lgfffancy 发表于 2017-7-8 16:35
谢谢，老师对于第一个问题 临床上是不是可以直接多染调补偿，连正常细胞作对照也不需要？ ...

奇怪，我前面这个问题连续回答了两次了呀，是直接多色染色，用标本内残留的正常细胞调节补偿的对照