碘化丙啶粘管道，清洗绝招知多少

niwanmao

在细胞周期检测或细胞死活鉴别中，经常会用到一些核酸染料，最常用的就是碘化丙啶（简称PI）。然而，PI用着方便、简单、便宜，但可能给管路清洗带来很大的麻烦，所以很多中心不愿意将机器给大家用来做细胞周期。另外，不仅仅是碘化丙啶，其它如7-AAD等核酸染料均存在粘附液路的风险。

但实际上，只要清洗得当，还是没关系的，大家无需过于担心。这里介绍一些国外FLOWER总结的清洗绝招，脑洞大开！大家可根据需要选择一种试试。



idea #1: 先跑一会儿DMSO，然后再用蒸馏水冲洗

由于PI在DMSO中的溶解度较高，所以可以考虑用DMSO先冲洗液路，但是国外有站友试了之后效果不是特别理想。

另外一个选择就是先用DMSO跑5分钟，然后再用Beckman Coulter的Clenz液跑5分钟，最后再用蒸馏水跑5分钟。



idea #2: 先跑乙醇，再用蒸馏水冲洗

原理图#1，也是利用乙醇溶解度高的原理，但似乎效果也一般。



idea #3 :用次氯酸钠

用终浓度0.1～0.5％的次氯酸钠溶液。

对于特别粘冲的染料（例如AO、7-AAD等），有BD仪器用户建议在BD冲洗步骤上增加70％乙醇，也就是说：

1、将终浓度0.1～0.5％的次氯酸钠溶液浸泡上样针，将支撑架打到一边，让上样针吸取1分钟，然后支撑架打回来，按照正常跑5分钟。

2、用70％乙醇，重复第一步步骤。

3、用蒸馏水，重复第一步步骤。

切记，每根管子跑完之后都要扔掉，不要重复使用。



idea #4: PI喜欢DNA，那么我就用DNA来解决

这个原理很有意思，就是利用PI容易与DNA结合的方式，用放置了很长时间的外周血样本，由于标本中的细胞基本上都碎了，所以白细胞释放出大量的DNA。新加坡的Te Chih推荐可以用这类标本上机，利用DNA结合残留的PI。



Idea #5: 用咖啡因

这个Idea很有意思，实属脑洞大开，但却有文章作为支撑。

大多数荧光染料通过静电可粘附在流式细胞仪液路上，从而对后续样品中的细胞产生影响。Bedner等人观察到，除了漂白水以外，也可以利用咖啡因溶液（例如以PBS配制的50mM咖啡因溶液）去除液路中或已被荧光染料污染的细胞中的粘附荧光素。 咖啡因对PI或吖啶染料有相当高的亲和力，并且可以用于从染色的细胞、染色的凝胶以及静电结合这些染料的细胞、玻璃或塑料表面去除这些异常粘附的染料。

参考文献：Bedner E, Du L, Traganos F, Darzynkiewicz Z. Caffeine dissociates complexes between DNA and intercalating dyes: application for bleaching fluorochrome-stained cells for their subsequent restaining and analysis by laser scanning cytometry. Cytometry. 2001 Jan 1;43(1):38-45. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11122483)


来源：Purdue MailList 2017-June 051858

happyeday

思路确实让人脑洞打开，但其实还是次氯酸溶液的效果最好也最快捷和经济。

遗落的沙罗

不错 谢谢分享