求教求教！！！关于GATE%和MFI的使用意义！！及Kaluza的使用!

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各位老师好：                @niwanmao
        1.首先，我往BHK细胞里转染了一个外源膜蛋白，想要用流式测定他的表达量，那我流式结果中GATE%和MFI的意义分别代表什么呢？我要表示蛋白表达水平用哪个值比较好一点？
        2.当我测定用BHK阴性细胞为对照时，GATE%比例达到90%左右，但用同型对照，样品GATE只能达到30-40%，这个时候我采取哪种结果比较好？
        3.使用BD的cellquest软件时，其直方图的FL1-H横坐标是以10的0次方开始，而贝克曼的KALUZA直方图横坐标是以0开始的，导致二者结果中的MFI值不一样，这有什么影响吗?
        4.Kaluza结果中的X-arichmetic mean和X-geometic mea哪个值可以作为是MFI?  cellquest软件中只有mean 和 geomean, 哪个值可以作为是MFI呢？
        5. 最后想求一个Kaluza的破解版，之前装的30天之后就不能用了


                     先谢谢各位老师~

niwanmao

1、GATED％表示 门内该蛋白的表达率，MFI表达蛋白表达的平均荧光强度，如果分群明显，建议用GATED％，如果分群不好，可以考虑用MFI。
2、先按照第一点定下分析数据再说。
3、这不是问题，但是不同数据必须用同一个软件分析。
4、一般抗原表达都用geometric mean。
5、Kaluza不建议用破解版。如果你真要用免费的，首页上就有两个，并且昨天刚发了一个新的免费软件CytoSpec。

18238802689

niwanmao 发表于 2017-7-13 08:23
1、GATED％表示 门内该蛋白的表达率，MFI表达蛋白表达的平均荧光强度，如果分群明显，建议用GATED％，如果 ...

1. 谢谢倪老师，我现在用生物学阴性细胞的结果比使用同型对照的结果好，而且在网上看到有老师这样说“如果需要检测的是经过培养的细胞，那么此时设置同型对照，也只能得到一些反映细胞粘附能力的信息，并且很难得到反映其非特异性荧光的信息。故检测培养后的细胞，设置同型对照是不理想的。”所以我决定不使用同型对照了，这个时候分群明显，采用GATE%是可以的吧。
2. 之前去参加了一个流式细胞术的培训，当时请教老师关于GATE%和MFI的使用选择，那位老师给的说法是：两个指标都可以用，GATE%反应转染效率，MFI反应蛋白表达量。关于这种说法您怎么看呢？

niwanmao

18238802689 发表于 2017-7-13 15:38
1. 谢谢倪老师，我现在用生物学阴性细胞的结果比使用同型对照的结果好，而且在网上看到有老师这样说“如 ...

1、可以的。
2、GATED％和MFI的使用，我的意见是前面所说的通用原则，如果分群明显，建议用GATED％，如果分群不好，可以考虑用MFI。如果反映在你的转染细胞上，该老师的说法也可以说正确的。

18238802689

niwanmao 发表于 2017-7-13 16:28
1、可以的。
2、GATED％和MFI的使用，我的意见是前面所说的通用原则，如果分群明显，建议用GATED％，如果 ...

谢谢倪老师

xuwenpku

倪老师，我接着求教一个问题，我的细胞阳性群只是一些突出来的点，在直方图上没有形成显著的峰，我计算MFI应该用全体细胞呢还是把那些阳性的点圈出来再计算呢？

niwanmao

xuwenpku 发表于 2017-7-15 08:50
倪老师，我接着求教一个问题，我的细胞阳性群只是一些突出来的点，在直方图上没有形成显著的峰，我计算MFI ...

没有峰的话，需要计算整体，但我觉得你这种结果可能不太会有显著性差异。

theelf

请问那俩免费的是不是没了？

niwanmao

theelf 发表于 2017-10-23 17:57
请问那俩免费的是不是没了？

一直都在啊，站内搜索一下关键词即可。

theelf

niwanmao 发表于 2017-10-24 13:56
一直都在啊，站内搜索一下关键词即可。

额，搜kaluza有6条帖子，都是30天试用版额，有一个1.5版本提示有病毒，但是装上还是提示30天试用