新人求助，用BD FACS canto机进行检测凋亡，阴阳群没分开

goggie

新人求助，各位老师，第一次用BD canto测定（以前用的贝克曼），阴阳群分不开，如图，看了教程，但上机后不知道画门及调电压，好郁闷……参数也不太会设定，有老师帮我看一下结果，教教我么？采用的是自动调补偿模式，感觉好诡异。（附件中是几个小时药物处理样品管及补偿调节管）

Minions

这个除了样品和试剂的问题除外，FSC,SSC和FITC和PI的电压是不是没调好？P1门看不到明显的细胞群；FITC和PI的电压是不是可以调大点，看看能否把群打开；FITC和PI的补偿本身就很大，做出来的图也不是非常好看！可以考虑一下APC与PI的搭配！

家的感觉

细胞是不是都碎片或死细胞了，怎么看不到明显的细胞群

goggie

家的感觉 发表于 2017-7-17 11:05
细胞是不是都碎片或死细胞了，怎么看不到明显的细胞群

我也不清楚，但是收集细胞镜下观察的时候，是没有发生大量死亡的。阴性管的FSC-SSC和之后加了染料的差别比较大。

niwanmao

goggie 发表于 2017-7-17 14:05
我也不清楚，但是收集细胞镜下观察的时候，是没有发生大量死亡的。阴性管的FSC-SSC和之后加了染料的差别 ...

试剂盒质量不好也会影响结果的，建议用大品牌的。
建议可以先用一个活力好、未用药物处理的样本先染染看，作为阴性对照，然后再用CCCP诱导凋亡作为阳性对照。这样就可以评估试剂盒质量了。

goggie

niwanmao 发表于 2017-7-17 18:13
试剂盒质量不好也会影响结果的，建议用大品牌的。
建议可以先用一个活力好、未用药物处理的样本先染染看 ...

好的，我换个样本试试看，谢谢倪老师

goggie

niwanmao 发表于 2017-7-17 18:13
试剂盒质量不好也会影响结果的，建议用大品牌的。
建议可以先用一个活力好、未用药物处理的样本先染染看 ...

我们用的是凯基生物的双染试剂盒，是BD工程师推荐的牌子，应该口碑还可以。会不会是细胞状态的问题？之前做了一批细胞虽然少，但感觉分群还是挺明显的，同一个试剂盒。这次阴性分群都不行。弱弱问一句，FSC-SSC的电压会严重影响到分群么？本该分开的分不开了，会不会是FSC-SSC上的电压没有调好？

niwanmao

goggie 发表于 2017-7-17 21:31
我们用的是凯基生物的双染试剂盒，是BD工程师推荐的牌子，应该口碑还可以。会不会是细胞状态的问题？之前 ...

如果能够确定之前分群好，那么试剂盒就没有问题，需要考虑样本的问题，或者处理时出现了什么问题

ghqiu09

你这个是什么细胞？感觉都是死细胞的样子，或者你把你的样品吸一点放在镜下看看细胞的形态对不对

zhenhuiWu

测凋亡前，细胞状态很重要，保持正常状态，PI和FITC的电压可以在参数那个页面调高或者调低。