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学院新买的贝克曼CytoFLEX,基本没人会用,所有条件只能靠自己摸索,文献看了不少,在论坛也学习了很多东西,找到一个也用live/dead kit做细菌染色的帖子,按照上面的信息自己做了一次,不知图有没有错。
有几个问题想请教各位老师:
1.样品是金黄色葡萄球菌,直径也就0.8微米-1微米左右,很小,不知道增益和阈值设置有没有错。FITC,PE,ECD这三个值是一篇文献上找的。FSC和SSC这两个值是自己设置的,其余是默认值,不知道合不合适
2.阈值是自己设置的,不知道合不合适,总觉得FSC-SSC图不太对,默认值是10的四次方,是在太大,于是从小开始设,
3.没有做荧光补偿,不知需不需要
4.收集的events在3W-4W左右,不知是否足够
5.菌液浓度在OD600 0.08,先前第一次做的时候因为不会调阈值,这次阈值调小了之后发现这个浓度太高了,应该0.03-004比较合适
希望各位老师赐教,不胜感激
还做了活细菌然SYTO9等等图,因为太多了就不一一放上来,如果老师需要看可以联系我
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