Treg标准设门和亚群区分

niwanmao

调节T细胞（Treg），以前被认为是抑制性T细胞，是一类特殊的T细胞，用于调节自身免疫和对抗病原体的平衡。
Treg既可通过分泌免疫抑制性因子（IL-10、TGF-beta等），也可通过直接抑制免疫效应T细胞（例如Th1、Th17等）减轻炎症。
Treg防止自身免疫性疾病的机制主要是维持对自身抗原的免疫耐受，在动物体内已经用Treg输注实现了治疗自身免疫性疾病的效果，在人类，目前对于移植和1型糖尿病的Treg治疗正在研究中。

由于Treg如此重要，所以需要用有效的标记来将这些细胞与其它T细胞有效区分开来，那么如何对Treg进行更好的设门呢？

标准的Treg的设门方法包括CD3、CD4、CD25、CD127、FoxP3，Treg定义为CD3＋、CD4＋、CD25hi、CD127lo、FoxP3＋。如下图：


如果要分选的话，foxP3就不能用了，可以通过CD25＋CD127lo来圈出Treg细胞，分选出培养、进行抑制性实验。


Treg分成很多类：tTreg、pTreg、iTreg等。
tTreg又称nTreg，从胸腺中产生，是最常见的亚群。pTreg则是外周组织产生，iTreg是利用TGF-beta诱导培养产生。CD39、Helios是可靠的区分tTreg、pTreg、iTreg的指标。


不过值得注意的是，活化的T细胞通常也会出现CD25上调，在一些效应T细胞中，也会出现foxP3的表达，所以目前Treg功能研究中，最难的就是Treg的纯度，用CD3＋CD4＋CD25＋CD127lo分选出的Treg中，可能就混杂着一些效应T细胞，其产生的细胞因子，可能就影响着你的实验结果，这些效应T就被称为披着羊皮的狼：



参考文献：
ExCyte，How To Differentiate T-Regulatory Cells (Tregs) By Flow Cytometry

niwanmao

ghqiu09 发表于 2017-8-10 08:54
从图2上看，如果只圈到CD127loCD25hi这块，而不标记Foxp3的话，Treg的纯度估计会在80%左右。但是不知道如果 ...

很多活化T细胞都会表达CD25，所以如果T细胞活化多，那么Treg占比就会很低。

ghqiu09

从图2上看，如果只圈到CD127loCD25hi这块，而不标记Foxp3的话，Treg的纯度估计会在80%左右。但是不知道如果不标记CD127，只看CD4CD25的话，Treg能占多少的百分比，因为我们实验中常常只标记CD4CD25

ghqiu09

niwanmao 发表于 2017-8-10 11:04
很多活化T细胞都会表达CD25，所以如果T细胞活化多，那么Treg占比就会很低。 ...

所以有些人选T细胞活化的标记的时候就选CD25？

mumu215

学习了 老师讲的很棒

yangmengbo

请问，正常人血液中Treg范围大致是多少？

niwanmao

yangmengbo 发表于 2018-3-4 22:55
请问，正常人血液中Treg范围大致是多少？

看这里：http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3075-1-1.html

yangmengbo

非常感谢！

xin373

倪老师，请问您说的这个Treg分群，人与动物的检测是一样的吗？
我现在同时在做大鼠外周血/脾脏，还有人外周血的Treg。大鼠的设门就是CD3、CD4、CD25、FoxP3，之前不知道还要CD127，结果虽然没有老师做的好看，但是还能看到明显的分群；那么，我还需要大鼠CD127进行补充吗？给的附图上面有标注外周血和脾脏（图1/图2）

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人外周血就比较麻烦了，由于是病人的血，CD4都没有看到分群，我自己也很纳闷，请你老师看下是哪里出的问题，CD3还没有到货，我这个是现有的4/25/FP直接上的，等抗体到了我准备再试一下（图3-5）。
我的样品处理过程是，先裂解RBC，再表抗染，之后通透固定，清洗后染FP。请问：
1. 裂解与3/4/25的染色的顺序有没有错？
2. 通透固定和抗体全套我都是EB的，目前通透的时间是30分钟，看到帖子里有通透更长的时间，有些怀疑自己的操作，所以想咨询倪老师~
3. 人的结果显示，是抗体的问题还是血样的问题？为什么4的分群会这样？

niwanmao

xin373 发表于 2018-7-18 17:39
倪老师，请问您说的这个Treg分群，人与动物的检测是一样的吗？
我现在同时在做大鼠外周血/脾脏，还有人外周 ...

没看懂每张图片代表什么样本。
PS：请以后提问另开帖子。