每个实验条件的检测都需要设置同型对照吗

钢蛋儿

     本人在试验中，利用外周血淋巴细胞，加或不加CD3/CD28，并加入细胞因子组合刺激，（大概有6种不同的细胞因子的组合方式），运用流式细胞术检测某一标志受不同刺激的表达情况。然后投稿时，一个专家提问说只设置一个同型对照是不够的，必须要设置所有刺激条件的同型对照，因为不同刺激条件的非特异性染色程度是不同的。我也知道他说的绝对是最有道理、最严谨的，求助老师，这个应该如何回复？

niwanmao

你测的是什么指标？

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2017-7-30 09:56
你测的是什么指标？

不好意思倪老师，前一段登录密码找不到了一直登不上流式中文网，终于想起来密码了

指标比较常见，一个实验是标记IL-17，另一个实验是标记Foxp3（IL-17和Foxp3所加刺激剂不同，故分开标记与检测）

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2017-7-30 09:56
你测的是什么指标？

当然还有其他的检测指标，都是单独分成几个小试验来干预的。

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2017-8-17 15:14
不好意思倪老师，前一段登录密码找不到了一直登不上流式中文网，终于想起来密码了

指标比较常见，一个实 ...

这两个分群如此清楚的，不需要设置同型对照啊。像你这种情况，应该是要做多色的，此时，经过Fc Blocking之后，荧光渗漏会占主要影响因素。

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2017-8-17 20:21
这两个分群如此清楚的，不需要设置同型对照啊。像你这种情况，应该是要做多色的，此时，经过Fc Blocking ...

我每次都只检测一个指标，所以没有用多色的。（因为检测指标不同、加的刺激剂也略有差异）。
就是因为分群不清楚，所以审稿人要求做同型对照，而且每个实验条件的检测都要求设置同型对照，我看到好几篇文献都是用相同的同型对照直方图形。

钢蛋儿

下图是文献看到的一个图，图例中就解释到都是用的一个同型对照条件"“stim. + IL-2 + TGF- β + ATRA + Rapa"。请问倪老师，您应该也遇到过这个多条件刺激的情况，请问该如何设置同型对照呢？（实际中可能不设置同型或者用FMO对照，但是投稿的话审稿一般会要求用同型对照啊）
谢谢~~

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2017-8-24 18:17
下图是文献看到的一个图，图例中就解释到都是用的一个同型对照条件"“stim. + IL-2 + TGF- β + ATRA + Rap ...

你的实验要检测的是一个指标，但是设门还需要其它抗体，所以还是会存在多色干扰的问题。如果要求的话，建议用Fc阻断＋同型对照＋邻近有干扰的荧光抗体作为对照。

钢蛋儿

niwanmao 发表于 2017-8-25 08:29
你的实验要检测的是一个指标，但是设门还需要其它抗体，所以还是会存在多色干扰的问题。如果要求的话，建 ...

谢谢倪老师，您说的我都懂。
但是现在我最想知道的是，假设只染一种指标，是否需要对所有条件设置同型对照呢？

niwanmao

钢蛋儿 发表于 2017-8-25 13:07
谢谢倪老师，您说的我都懂。
但是现在我最想知道的是，假设只染一种指标，是否需要对所有条件设置同型对 ...

只染一种指标，但是因为同时要加其它抗体，所以才要用FMO＋Fc Blocking，但是因为你担心评审提问，所以就在前面这根管子里面再加检测指标对应的同型对照