流式世界的5大类荧光素

niwanmao

荧光素主要分为五大类：

1、荧光蛋白
荧光蛋白又可以分为两组：
第一组蛋白质结构编码了荧光。这些荧光蛋白包括绿色荧光蛋白（GFP）、YFP、RFP和各种衍生物。
这些荧光蛋白可以克隆到研究者最喜欢的靶标载体中，并通过使用该荧光蛋白来跟踪靶标的表达。

第二类荧光蛋白是衍生自在藻类和植物中发现的藻胆蛋白的那些。这些蛋白质使用藻胆蛋白辅因子来吸收光能，包括藻红蛋白（PE）、别藻蓝蛋白（APC）和紫草素叶绿素（PerCP）。

植物素蛋白，尤其是PE，是研究人员目前可获得的最亮的荧光分子（下图为藻红蛋白及其辅因子的结构）。


应该注意的是，虽然这些分子在流式细胞术中表现非常好，但是不太适用于荧光显微镜，因为它们会被快速淬灭。


2、合成类小分子

合成类分子荧光素是在流式细胞术中具有悠久历史的广泛类型的相对较小的荧光化合物。
这些分子在环、链或其组合中都含有至少一个共轭双键体系，在受光激发时发生改变（参见下图，FITC和Cy5的结构）。


合成染料可覆盖整个光谱，并可通过不同配置改变其溶解度和细胞通透能力。


3、量子点
在二十世纪末期，量子点（QDots）染料渐渐开始普及。
QDot是一种半导体，可以根据粒子的尺寸调整其不同的发射波长（参见下图的QDot荧光图）。


这些QDots具有亮度高、光稳定性好，但由于在流式细胞术中，QDots通常被紫激光激发，所以可能影响了其普及性。尽管Qdot也可以被低于发射光最大值的激光激发，但设计方案时还是需要注意。


4、聚合物染料
聚合物染料由Sirigen开发，亮度高，主要是紫光和紫外光激发（BV系列和BUV系列），还有蓝光激发的系列（Brilliant Blue）。

5、串联染料
串联染料是利用Förster共振能量转移（称为FRET或荧光共振能量转移）原理的特殊类别的荧光分子。
在这个过程中，两个荧光染料在位置上非常近。 供体分子的发射光必须与受体分子的激发光波长重叠。
当供体分子被激发时，电子被促进到更高的能量状态，并将能量转移到受体分子，其本身则返回到基态，从而产生另一种波长的光子。
原理见下图：




了解了染料的种类及其原理，对于我们挑选染料还是有一定帮助的。


参考文献：
https://expertcytometry.com/why- ... -in-flow-cytometry/

niwanmao

我爱学习 发表于 2018-1-4 14:43
倪老师您好，想请教一下串联染料，比如PE-Cy5，这个染料是488nm激发，PE的能量在给到后面的Cy5，然后在600 ...

串联染料正常情况下不会被两个波长激发，只会被第一个分子的波长激发。

只有在什么情况下会被两种波长激发呢？就是串联染料降解后。

2007phoenix

辛苦倪老师 隔着时差还要发文  给您101个赞！

mumu215

学习了！老师讲的很好

我爱学习

倪老师您好，想请教一下串联染料，比如PE-Cy5，这个染料是488nm激发，PE的能量在给到后面的Cy5，然后在600多有个发射光。单独的cy5这个染料可以被642nm激光器激发。如果仪器488和642nm的激光器同时打开，对于PE-Cy5这个染料会受到642nm激光器的影响吗，还是串联染料经过改造之后，只会被单一的一个激光器激发，不同时受到其他激光器的干扰。谢谢您。