小鼠外周血MDSC分析

ganjun5566 · 发表于 2017-8-19 00:05:12

小鼠外周血物理参数图

这是上一张图区域分出来后

请问我这个是小鼠外周血裂解后的图，如果要做MDSC，应该选择哪一群细胞？是先溶血素裂解还是先加CD16封闭FCR，这个是先裂解的，不知道为什么后裂解我的碎片总是很多。
我的步骤是：

1血液中MDSC 的测定:

1. 小鼠断尾取血100ul左右

2. 加入红细胞裂解液500ul，裂解10min，PBS洗涤2遍(1500rpm，5 min)

3.移液枪吸取100ul抗凝血液，加入 4ul CDl6/32抗体，冰上封闭20分钟，然后加入APC-anti-mouse CD11b ,FITC anti-mouse ly-6C和PE- anti-mouse ly-6G 5ul , 冰上孵育20分钟

4. 加入PBS1ml混匀后以1500r/min离心，弃上清，洗涤两次

5. 加入0.3ml PBS，流式

ganjun5566 · 发表于 2017-8-19 10:35:36

自己顶一下，倪老师能帮忙看一下吗
?

niwanmao · 发表于 2017-8-19 21:28:39

设门如下：

yxy0803 · 发表于 2018-9-8 22:48:58

niwanmao 发表于 2017-8-19 21:28
设门如下：

请问倪老师，这样圈门的依据是什么呢？能不能详细讲解下呀~

mybiosciences · 发表于 2018-9-8 23:07:27

用的什么溶血素是否有固定剂？
没有固定剂的一个先溶后染

LWYL · 发表于 2020-6-2 16:44:13

抗体加这么多吗？是直接加不稀释的抗体5微升？还是稀释后的抗体？

大品咿呀哟 · 发表于 2020-6-8 17:18:58

我们课题组专门做MDSC不知道你有什么问题
小鼠PBMC得到之后正常流式图是有3群细胞（淋巴，单核，粒）MDSC有两个亚群一种是PMN-MDSC属于粒细胞群位置另外一种是M-MDSC属于单核细胞群位置，因此圈门是单核+粒
先裂红我们用ACK，然后直接PBS终止离心，染色一般抗体在0.2ul/million就可以了。

大品咿呀哟 · 发表于 2020-6-8 17:20:51

具体圈门策略是
CD11b阳性的细胞里圈6G+6Clo—PMN
6G-6Chi——M

菜根谭 · 发表于 2021-2-16 14:05:37

niwanmao 发表于 2017-8-19 21:28
设门如下：

请问倪老师，第一张流式图中，SSC和FSC红色圈门旁边的细胞群什么细胞呀？为什么没有圈进去呢？

niwanmao · 发表于 2021-2-17 12:01:59

菜根谭发表于 2021-2-16 14:05
请问倪老师，第一张流式图中，SSC和FSC红色圈门旁边的细胞群什么细胞呀？为什么没有圈进去呢？ ...

问题重复，已在另一个帖回答：
小鼠外周血中性粒细胞流式检测
https://www.flowcyto.cn/bbs/thread-8920-1-1.html
(出处: 流式中文网)

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