临床流式细胞术：不仅仅是诊断

niwanmao

这篇评论是Mayo诊所的Fiona E. Craig博士发表在2017年8月18日最新一期的Cytometry B Clin Cytom上的，说的非常好，特翻译如下。

本期杂志文章的专题是流式细胞仪在临床领域的多种应用。但我觉得临床流式不应该只是诊断，我在此选择了几个病例来说明如何使用流式细胞术不仅可以诊断，还可以帮助患者管理。 先来看两名患者，一名13岁的男孩，易疲劳，容易出现瘀伤，还有一名60岁淋巴细胞增多的老年患者。

小男孩的检测结果提示了全血细胞减少症和低细胞性骨髓增生，虽然检查结果提示诊断为再生障碍性贫血，但小儿血液学家也在考虑遗传性骨髓衰竭综合征，而血液病理学家并不确定皮质下骨髓取样是否具有真正的代表性。因此，他们继续送了个外周血，用于阵发性睡眠性血红蛋白尿（PNH）克隆的流式细胞术评估。在以前一期杂志上，Raza及其同事报道说，在18.5％的再生障碍性贫血患者中，有1％以上的粒细胞存在PNH克隆。在本期杂志上，Morado及其同事通过西班牙24个实验室和巴西1个参照中心近4000种外周血样品，为这一观察提供了更大数据的支持。当与您的临床同事讨论PNH流式细胞仪的实用性时，Marado的文章是非常有价值的。（Morado M, Sandes AF, Colado E, Subirá D et al., Diagnostic screening of paroxysmal noctural hemoglobinuria: prospective multicentric evaluation of the current medical indications. Cytometry B Clin Cytom. 2017）

有意思的是，Marado及其同事还在报告中提及，在出现溶血症的患者中观察到被抑制的“正常”残留造血与PNH克隆共存，这一观察结果表明，仅报道PNH阳性细胞的百分比可能不足以准确监测PNH中的疾病负担。

回到我们的案例研究中，那名13岁的男孩后来检测发现少量红细胞和嗜中性粒细胞具有PNH样免疫表型，支持再生障碍性贫血的诊断。于是他随后进行了同种异体干细胞移植。那么问题来了，移植后巨细胞病毒（CMV）重新激活的风险是什么，细胞恢复后会CMV会自动消失吗？ CMV抗原特异性T细胞（CAST）介导的免疫的快速恢复对于预防和控制CMV疾病至关重要。以前已经显示，由多个重组MHC I类分子组成的荧光标记的合成化合物，每一种与特定的肽序列相关联，可用于检测抗原特异性CD8阳性T细胞，在最近的期刊中，Tario及其同事证明，MHC Dextramer试剂可以顺利地从BMT受体的外周血中检测出CAST。在本期杂志中，JournalPelák及其同事使用了不同的流式细胞术方法来确定哪些功能性T细胞亚群保护患者免受CMV再激活发作，哪些与预后相关性最大。在其测定中，单核细胞与CMV肽和整个CMV裂解物一起孵育，通过流式细胞术测量T细胞亚群的IFNγ、IL-2和CD107a和CD154的表达。作者建议对移植后发生CMV病毒血症的患者进行CMV特异性T细胞评估，当检测到具有双重阳性（IFNγ+ IL-2 +）或单阳性（IFNγ+）CD8阳性的CMV特异性T细胞，病毒血症可能会在两周内解决。这些流式细胞术研究可以帮助指导CMV重新激活的适当预防，监测和治疗。（Pelák O, Stuchlý J, Król L, Hubáček P, et al., Appearance of CMV Specific T-cells Predicts Fast Resolution of Viremia post Hematopoietic Stem Cell Transplantation. Cytometry B Clin Cytom. 2017）

接下来再谈前面提到的谈到60岁老年患者，你是如何确定淋巴细胞增多症的病因？在本期杂志中，巴西流式细胞术组（GBCFLUX）描述了一种系统的、逐步推进的、具有成本效益和可重复性的免疫分型方法，可以获得准确的诊断。他们使用的方法与Sandes及其同事最近在其关于CD200表达在成熟B细胞肿瘤诊断中的作用、Demurtas及其同事对非霍奇金淋巴瘤诊断和分类等文章中提出的算法相似。使用类似的策略，我们对该患者进行流式细胞术免疫分型，发现该患者具有慢性淋巴细胞白血病（CLL）特征：CD20微弱表达、CD5阳性，CD23阳性，CD200高阳性、κ弱阳性。除了流式，患者还检测了荧光原位杂交和分子免疫球蛋白可变区域突变分析，确定了患者的CLL具有侵袭性的特征。

在患者对CLL的常规治疗失败之后，血液肿瘤学医师考虑了新型疗法，例如抗凋亡蛋白BCL-2的选择性抑制剂。Degheidy及其同事的流式细胞术证明了CLL患者的BCL-2水平通常较高，机制很多，例如13q14缺失导致miR-15/16下调。事实上，最近已经认识到，初发CLL细胞的自发体外凋亡与疾病进展的风险相关。然而，BCL-2只是控制细胞凋亡的更大家族分子的一个成员，该家族还包括BCL-XL、MCL-1和促凋亡成员BID、BIM、BAX和BAK。在本期杂志上，Smith及其同事介绍了一种可用于测量BCL-2家族成员蛋白的定量荧光细胞计数方法，并在体外预测细胞对选择性BCL-2家族抑制剂的反应。这样的测定可以提供用于选择患者治疗的有用信息。

通过这些例子和文章，我相信你应该明白了，临床流式细胞仪不仅仅是诊断，而且在个体化医学中也有越来越大的未来作用。

参考文献：
Craig FE. Clinical flow cytometry: It's not just about reaching a diagnosis. Cytometry B Clin Cytom. 2017 Aug 18.