用SYBR I 染液检测水体中细菌的含量问题

lgfffancy

用SYBR  I 染液检测水体中细菌的含量为什么要用FITC(530nm)和PerCP(675nm)呢？ 我的认为这是单个荧光啊 用FITC通道才正确，为什么还要用PerCP通道？

很困惑，这是为啥呢？

niwanmao

lgfffancy 发表于 2017-9-3 17:08
十分感谢，但是我不太了解的是既然只有一个染料，确实荧光 用FITC通道，但是这里用双荧光通道来分析有何 ...

这个原因的话，如果你做流式做多了就会有数了，采用有荧光补偿的相邻空白通道来设门，可以区分出更纯的细胞。用SSC不是说不好，但肯定效果没有675nm通道的好。

我想成大牛

可能是为了去除上面的那些杂质吧。

lgfffancy

我想成大牛 发表于 2017-8-31 13:54
可能是为了去除上面的那些杂质吧。

？能具体讲讲吗，不太懂呢~

我想成大牛

lgfffancy 发表于 2017-8-31 16:24
？能具体讲讲吗，不太懂呢~

你用的是Green的染料吧，它的发射波谱和FITC相近，因此，用488nm激发的时候可以检测520-530nm的信号。理论上其他通道的荧光信号都应该是阴性的（你图里面就是小于10^3的点），所以通过一些阴性通道可以去除一些非特异的荧光信号。但是看你的图感觉FITC和Percp通道间没有调整补偿。补偿后会更好看一点，上面那些斜向的点会变成FITC阴性的。

niwanmao

艾森公司的一份技术资料里面的一个图，或许可以解答你的疑惑（见下图及其图释）：

lgfffancy

niwanmao 发表于 2017-8-31 19:55
艾森公司的一份技术资料里面的一个图，或许可以解答你的疑惑（见下图及其图释）：

十分感谢，但是我不太了解的是既然只有一个染料，确实荧光 用FITC通道，但是这里用双荧光通道来分析有何目的？ 我觉得675nm那个通道完可以用SSC-H来代替，请老师解释一下用双荧光通道的目的，谢谢

lgfffancy

niwanmao 发表于 2017-9-4 08:09
这个原因的话，如果你做流式做多了就会有数了，采用有荧光补偿的相邻空白通道来设门，可以区分出更纯的细 ...

谢谢ni老师~

木子古心

niwanmao 发表于 2017-8-31 19:55
艾森公司的一份技术资料里面的一个图，或许可以解答你的疑惑（见下图及其图释）：

请问能否告诉我该图出处的资料吗？