有谁测过KG-1a这个细胞吗

特勒兮兮 · 发表于 2017-9-28 10:24:57

本帖最后由特勒兮兮于 2017-9-28 21:03 编辑

本人测一个CAR-T的靶细胞，KG-1a，但是测出来的CD123和同型对照比一点阳性也没有，不应该，而且同型对照的信号有点太强，想问问是不是由于背景信号太强，而覆盖了本来应该有的但是不强的阳性信号，求支援，要被老板骂了

niwanmao · 发表于 2017-9-28 17:25:43

KG-1a的CD123虽然表达，但确实分得不太好，你这里可能还存在抗体滴度的问题，叠加后应该还是可以看出右移的。

为了分得更开一点，可以做一个抗体浓度梯度试试。

特勒兮兮 · 发表于 2017-9-28 21:00:04

niwanmao 发表于 2017-9-28 17:25
KG-1a的CD123虽然表达，但确实分得不太好，你这里可能还存在抗体滴度的问题，叠加后应该还是可以看出右移的 ...

做抗体滴度倒是没问题，但是没有合适的同型对照，之前用BD说明书推荐的同型对照测，结果荧光强度都是一样的，真不知道该怎么测他的阳性率了

特勒兮兮 · 发表于 2017-9-28 21:04:27

niwanmao 发表于 2017-9-28 17:25
KG-1a的CD123虽然表达，但确实分得不太好，你这里可能还存在抗体滴度的问题，叠加后应该还是可以看出右移的 ...

要用这个细胞做CAR-T实验，结果完全不知道这个阳性率该怎么确定

niwanmao · 发表于 2017-9-29 07:38:24

特勒兮兮发表于 2017-9-28 21:04
要用这个细胞做CAR-T实验，结果完全不知道这个阳性率该怎么确定

直接测的话，我的建议还不如直接用细胞不染色 Fc Block之后，作为对照，然后检测组Fc Block之后标记CD123。

特勒兮兮 · 发表于 2017-9-29 11:29:22

niwanmao 发表于 2017-9-29 07:38
直接测的话，我的建议还不如直接用细胞不染色 Fc Block之后，作为对照，然后检测组Fc Block之后标记CD123 ...

不染色，直接加FCblock，不就跟空白对照一样吗，不加抗体直接上机

niwanmao · 发表于 2017-9-29 20:14:29

特勒兮兮发表于 2017-9-29 11:29
不染色，直接加FCblock，不就跟空白对照一样吗，不加抗体直接上机

有点不一样，处理因素和实验组一样，就是少加了抗体。
即使理论上一样，但是做科研还是希望能够将各种因素控制成一样，只留下一个实验因素不同，你觉得呢？

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