分析数据时裸细胞在fitc通道有疑似分群？考虑什么原因？

zhangyy · 发表于 2017-10-14 10:00:40

新手提问，请各位老师帮忙答疑解惑！

如图，在做外周血PBMC流式细胞分析时，裸细胞在fitc通道有疑似分群，目的细胞（样本）在fitc通道有较明显分群，考虑什么原因？根据这样的结果，是否能够得出我的目的细胞的确在fitc通道有分群？还是假阳性？

niwanmao · 发表于 2017-10-14 15:53:36

空白管这不叫分群，这些信号可能是非特异性粘附

zhangyy · 发表于 2017-10-15 00:03:03

niwanmao 发表于 2017-10-14 15:53
空白管这不叫分群，这些信号可能是非特异性粘附

那老师您看我的样本目的细胞管分群了吗？还是也是非特异性粘附？因为位置看着一样…

niwanmao · 发表于 2017-10-15 10:05:24

zhangyy 发表于 2017-10-15 00:03
那老师您看我的样本目的细胞管分群了吗？还是也是非特异性粘附？因为位置看着一样… ...

我平时判断非特异性染色不会只看一个通道，而是综合FSC、SSC的位置，以及其它特异性标记的表达，尤其是多色流式，有时候在一个通道发生的分群，很可能是另一个通道的补偿没有调节好，必须要谨慎谨慎再谨慎。
因为我不知道你的方案搭配如何，原始数据如何，所以无法给你明确的答复，但你可以按照前面所讲的思维方式去分析试试！

a86856635 · 发表于 2017-10-16 15:17:17

别的荧光通道也看下，可能是自发荧光

zhangyy · 发表于 2017-11-8 15:31:44

niwanmao 发表于 2017-10-15 10:05
我平时判断非特异性染色不会只看一个通道，而是综合FSC、SSC的位置，以及其它特异性标记的表达，尤其是多 ...

倪老师，我其他通道的确是有明显分群，但我不知道1通道的分群是不是其他通道漏过去的，您说要综合看，我还是有点不太明白。

zhangyy · 发表于 2017-11-8 15:33:09

a86856635 发表于 2017-10-16 15:17
别的荧光通道也看下，可能是自发荧光

别的通道的确是有明显分群的，因为我染了4个色，其中三个色都是有明显分群（染的是CD3、CD8分子），所以还是不知道1通道是不是漏过去的

niwanmao · 发表于 2017-11-9 08:13:46

zhangyy 发表于 2017-11-8 15:31
倪老师，我其他通道的确是有明显分群，但我不知道1通道的分群是不是其他通道漏过去的，您说要综合看，我 ...

意思是你如果跟其它抗体一起染色，那边把散点图的另一个坐标调节为其它参数，逐一看过去。

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