流式调节补偿问题

胖连喵

最近在尝试染小鼠的巨噬细胞，因为涉及到表面标记和胞内标记问题，同时染的话是先染表面再染胞内，但是我的表面标记的染料间需要调节补偿，胞内标记的不需要，那我调节补偿的单染管还要经过固定破膜的步骤吗？还是直接染表面就好了。。。直接染的话是不是还需要另外设一个不经过固定破膜的空白对照。。。

niwanmao

1、先染胞膜，再固定、破膜后，标记胞内。
2、单染补偿管不用破膜

胖连喵

niwanmao 发表于 2017-10-18 19:13
1、先染胞内，再固定、破膜后，标记胞内。
2、单染补偿管不用破膜

1先染胞内，再染表面吗？
2 补偿的调节是与电压有关，单染补偿管不用破膜，那空白对照也得是不破膜的吗？得设两个空白对照吗？一个不破膜，用于调节补偿，另外一个破膜，用于测巨噬细胞用？

niwanmao

胖连喵 发表于 2017-10-19 01:06
1先染胞内，再染表面吗？
2 补偿的调节是与电压有关，单染补偿管不用破膜，那空白对照也得是不破膜的吗？ ...

抱歉，昨天笔误，应该是先胞膜，再固定破膜染胞内，已纠正。
空白对照只是大概用于确定电压的，一个即可。有时候有经验不用亦可。

胖连喵

niwanmao 发表于 2017-10-19 10:31
抱歉，昨天笔误，应该是先胞膜，再固定破膜染胞内，已纠正。
空白对照只是大概用于确定电压的，一个即可 ...

谢谢您的回复，我上次做的空白是经历过固定破膜的，调节好电压后，然后上了单染管（未固定破膜）想着调节补偿，感觉之前调节的电压有点高。。。。

niwanmao

胖连喵 发表于 2017-10-19 16:43
谢谢您的回复，我上次做的空白是经历过固定破膜的，调节好电压后，然后上了单染管（未固定破膜）想着调节 ...

破膜之后，荧光信号是会发生偏移，所以需要用未固定破膜的调节电压

胖连喵

niwanmao 发表于 2017-10-19 20:00
破膜之后，荧光信号是会发生偏移，所以需要用未固定破膜的调节电压

谢谢您的回复，那我基本上就 空白（未固定破膜），单染管（未固定破膜），试验管（固定破膜）；空白管调节电压，单染管调节补偿，然后试验管就是直接检测。那样试验管不会存在电压差吗？我这么描述对不对，麻烦您了~~~