凋亡圈门问题？？？

Helen_ztt · 发表于 2017-10-19 21:34:39

本帖最后由 Helen_ztt 于 2017-10-19 21:34 编辑

@niwanmao呼叫倪老师，请教倪老师凋亡圈门问题，因为是流式初学者，很多问题还没弄明白，问题粗浅，请多见谅啊！
第一组是空细胞，没做任何处理，我想拿来做阴性对照，如图negative control，分成三小团，最左边的是碎片吧，最右边的P2是主细胞团，中间的小团P1是什么呢？
当我加了染料开始，中间小团P1就增多，比如单染7AAD的时候，如图7AAD。
在7AAD组圈细胞时，当我只圈P2（如图7AAD-1），Q1里只有1.65%的细胞（这个区域应该是7AAD染色的细胞吧）。
但当我把P2和P1都圈上时（如图7AAD-2），Q1里可见25.2%的细胞，但是这些细胞有分成了两个小群，这是为什么？
问题1：我应不应该把P1圈进去？
问题2：如果把P1圈进去，为什么Q1细胞分成两个小群？是什么原因引起的？

谢谢！

ghqiu09 · 发表于 2017-10-19 21:34:40

Helen_ztt 发表于 2017-10-20 10:00
是的，是C6，你好厉害，怎么看出来的？

圈门的时候需要把两群都圈进去，因为细胞死了之后，fsc/ssc图上的位置就是有区别的。当然，阴性对照上，死细胞位置上最好不要有多少细胞或者少量细胞。收细胞时，如果是贴壁细胞，同样要把漂着的细胞收集，以前师姐告诉我说，这部分细胞也可能是药物导致细胞的死亡的。

niwanmao · 发表于 2017-10-20 07:50:16

你把SSC用LIN显示出来看看，有可能是已发生凋亡的细胞，可以试着圈进去看看。

ghqiu09 · 发表于 2017-10-20 09:19:42

有预感这是C6仪器得到的数据

Helen_ztt · 发表于 2017-10-20 09:58:44

niwanmao 发表于 2017-10-20 07:50
你把SSC用LIN显示出来看看，有可能是已发生凋亡的细胞，可以试着圈进去看看。 ...

这张是LIN的SSC的，碎片上方有一小团，我需要把它圈进去吗？

Helen_ztt · 发表于 2017-10-20 10:00:58

ghqiu09 发表于 2017-10-20 09:19
有预感这是C6仪器得到的数据

是的，是C6，你好厉害，怎么看出来的？

家的感觉 · 发表于 2017-10-20 10:57:55

Helen_ztt 发表于 2017-10-20 10:00
是的，是C6，你好厉害，怎么看出来的？

一般只有C6的坐标才能到10的7次方

ghqiu09 · 发表于 2017-10-20 14:49:14

家的感觉发表于 2017-10-20 10:57
一般只有C6的坐标才能到10的7次方

我倒是先看到的是楼主7AAD-2图上，三通道上分了两小群细胞，C6仪器就是比较恶心，总是碰到各种各样奇怪的问题。后来我才注意到了坐标的值的大小

Helen_ztt · 发表于 2017-10-20 16:48:42

家的感觉发表于 2017-10-20 10:57
一般只有C6的坐标才能到10的7次方

原来如此

Helen_ztt · 发表于 2017-10-20 16:49:47

ghqiu09 发表于 2017-10-20 14:49
我倒是先看到的是楼主7AAD-2图上，三通道上分了两小群细胞，C6仪器就是比较恶心，总是碰到各种各样奇怪的 ...

是啊，好奇怪，为什么就分出两小群了？请问这有办法避免吗？

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